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大蒜素对caco-2细胞胆固醇排出及ABCG5/ABCG8表达的影响

作　者: 胡艳
导　师: 王佐
学　校: 南华大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 大蒜素载脂蛋白E基因敲除小鼠 Caco-2细胞三磷酸腺苷结合盒转运子G5 三磷酸腺苷结合盒转运子G8 胆固醇转运
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的：探讨大蒜素对载脂蛋白E基因敲除小鼠小肠以及Caco-2细胞胆固醇转运相关基因的表达影响,明确大蒜素的抗动脉粥样硬化作用机制。方法：48只6周龄雄性apoE-/-小鼠,体重(20.1±1.6)g,随机分为四组,每组各12只：Ⅰ普食组(正常饲料喂养,PBS 0.1ml/2d,腹腔注射),Ⅱ高脂高胆固醇组(高脂高胆固醇饲料喂养,PBS 0.1ml/2d,腹腔注射),Ⅲ高脂高胆固醇+大蒜素组(高脂高胆固醇饲料喂养,大蒜素0.1ml/2d,腹腔注射),Ⅳ普食+大蒜素组(正常饲料喂养,大蒜素0.1ml/2d,腹腔注射),其中的高脂饲料为正常饲料加2%胆固醇和10%猪油。12周后,所有小鼠经20%乌拉坦0.2～0.3ml腹腔麻醉,摘除眼球取血,采用氧化酶法测定apoE-/-小鼠血清中三酰甘油(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol, TC)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol, HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol, LDL-C)含量。石蜡切片HE染色检测apoE-/-小鼠主动脉根部横切面动脉粥样硬化病变。免疫荧光检测小鼠小肠中ABCG5和ABCG8的表达。RT-PCR检测小鼠小肠组织中ABCG5和ABCG8 mRNA表达。Caco-2细胞经培养传代分为四组：ⅠCaco-2细胞对照组,ⅡCaco-2细胞模型组,Caco-2细胞模型+大蒜素处理组,ⅣCaco-2细胞+大蒜素处理组。加相应的处理因素处理后,高效液相色谱法测量细胞内胆固醇含量,油红O染色观察细胞内的脂滴,RT-PCR和Western Blot分别检测细胞中ABCG5和ABCG8 mRNA和蛋白表达。结果：高脂高胆固醇组小鼠血清TC、TG、HDL-C、LDL-C水平均高于普食组,高脂高胆固醇+大蒜素组的TC、TG、以及LDL-C的水平均显著低于高脂高胆固醇组(p<0.05), HDL-C有升高趋势,但无统计学意义；普食+大蒜素组的TC、TG、LDL-C均低于普食组,且差异有显著性(p<0.05)。高脂高胆固醇+大蒜素组、普食+大蒜素组分别与高脂高胆固醇组、普食组之间进行对比显示,小鼠主动脉窦斑块面积前者相应的低于后者,且存在显著差异性(p<0.05或p<0.01)。组织免疫荧光和RT-PCR显示,载脂蛋白E基因敲除小鼠高脂高胆固醇+大蒜素组、普食+大蒜素组ABCG5和ABCG8蛋白和mRNA表达分别高于高脂高胆固醇组和普食组,Caco-2细胞模型+大蒜素处理组和Caco-2细胞+大蒜素处理组的ABCG5和ABCG8蛋白和mRNA分别显著高于Caco-2细胞模型组和Caco-2细胞对照组(p<0.05或p<0.01),Caco-2细胞油红O染色显示加大蒜素处理组的脂质沉积均相应的低于没有加大蒜素处理的组,进一步的高效液相色谱测定结果显示,加大蒜素处理的细胞中总胆固醇含量明显降低(p<0.05或p<0.01)。结论：①大蒜素能够减轻载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化病变；②大蒜素能够上调载脂蛋白E基因敲除小鼠小肠中三磷酸腺苷结合盒转运子G5和G8的表达；③大蒜素能够上调人结肠腺癌细胞(Caco-2)中三磷酸腺苷结合盒转运子G5和G8的表达,促进细胞内胆固醇的排出。

全文目录

主要缩略语英文索引  4-5
中文摘要  5-7
ABSTRACT  7-9
引言  9-10
实验材料  10-12
实验方法  12-18
实验结果  18-30
讨论  30-34
结论  34-35
参考文献  35-39
文献综述  39-54
硕士期间发表、待发表论文  54-55
致谢  55

大蒜素对caco-2细胞胆固醇排出及ABCG5/ABCG8表达的影响

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