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HSF1/HSPs在C57BL/6J小鼠耳蜗的表达

作　者: 王少立
导　师: 褚汉启
学　校: 华中科技大学
专　业: 耳鼻咽喉头颈外科学
关键词: C57BL/6J 小鼠 HSF1 HSP90 HSP70 AHL
分类号: R764.436
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的研究在年龄相关性听力损失（Age-related Hearing Loss, AHL）模型中，热休克转录因子1（Heat Shock transcription Factor1, HSF1） mRNA及HSF1蛋白、热休克蛋白（Heat Shock Protein,HSP）70及90在内耳的表达变化，并探讨在AHL模型中三者的关系以及在AHL发生发展中可能的作用机制。方法分别随机选取4周、12周、24周、44周龄C57BL/6J 小鼠为实验对象，应用实时定量聚合酶链反应（Real time-polymerase chain reaction, RT-PCR）检测HSF1在mRNA水平上在各年龄组小鼠内耳的表达水平；采用免疫组织化学、免疫荧光组织化学及western blot方法确定HSF1、HSP70、HSP90蛋白在耳蜗内的定位及含量变化。结果RT-PCR结果显示HSF1在mRNA水平上，表达随年龄增长而增加。免疫组织化学、免疫荧光组织化学显示HSF1主要表达于C57BL/6J小鼠耳蜗齿间细胞-螺旋板缘、螺旋嵴和螺旋韧带，而毛细胞、血管纹和螺旋神经节染色相对较弱，随着年龄的增长，荧光强度逐渐增加，且在同一个耳蜗内，顶回的染色强度要强于中、底回；HSP70可表达于基底膜、前庭膜、齿间细胞-螺旋板缘、螺旋韧带-螺旋嵴、螺旋神经节等广泛部位，但含量较少，且在同一个耳蜗内同HSF1，顶回染色强于底回；HSP90表达相当广泛，基底膜、前庭膜、螺旋韧带-血管纹、齿间细胞-螺旋板缘及螺旋神经节-神经纤维均有明显的表达，随着年龄的增长，两种热休克蛋白的免疫荧光均逐渐增加。Western blot结果显示HSF1及HSP90在各年龄组小鼠中均随年龄的增长有增高的趋势，而HSP70可能因为在组织内的含量较低，而未见明显条带。结论本研究发现HSF1在C57BL/6J小鼠内耳中主要表达于齿间细胞-螺旋板缘、螺旋嵴和螺旋韧带等部位，且在蛋白质和mRNA水平上均随年龄增长有增高的趋势。HSP70和HSP90在内耳中表达广泛，也均在蛋白质水平上呈现年龄增长性表达增高。HSF1和HSP70在同一个耳蜗内顶回表达高于底回。HSF1、HSP70及HSP90的这种年龄增长性表达增高可能在AHL中起重要的作用。

全文目录

摘要  5-6
ABSTRACT  6-7
前言  7-9
主要材料试剂和仪器  9-14
实验方法  14-25
实验结果  25-34
讨论  34-38
结论  38
参考文献  38-41
附录主要缩略词一览表  41-42
综述  42-49
  参考文献  45-49
致谢  49

HSF1/HSPs在C57BL/6J小鼠耳蜗的表达

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