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EphrinB2对结肠癌SW480细胞生物学行为的影响及其机制研究
作 者: 陈旺盛
导 师: 傅仲学
学 校: 重庆医科大学
专 业: 外科学
关键词: 结直肠癌 EphrinB2 肿瘤血管生成 侵袭 转移
分类号: R735.35
类 型: 硕士论文
年 份: 2013年
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内容摘要
目的:在体外实验中研究利用RNA干扰技术沉默EphrinB2基因对结直肠癌生物学行为的影响,并探讨其可能的机制,为结直肠癌的早期诊断和基因治疗提供理论依据和实验基础。方法:用Western Blot与RT-PCR分别检测SW480、SW620、LOVO、HT29细胞中EphrinB2蛋白及mRNA表达水平筛选出高表达EphrinB2的结直肠癌细胞SW480;将三个干扰质粒(Psilencer2.1-E65,Psilencer2.1-E376,Psilencer2.1-E730)转染293T细胞(外筛),用RT-PCR和Western Blot检测EphrinB2mRNA和蛋白的表达情况,筛选干扰效果最好的干扰质粒;然后转染入高表达EphrinB2的结直肠癌细胞(内验),将实验分3组:①空白对照组(CON):不转染质粒②阴性对照组(NC):转染阴性质粒③RNA干扰组(RNAi):转染pSilencer2.1-EphrinB2-shRNA376;流式细胞仪检测各组细胞凋亡,筛选建立稳定转染细胞株;对上述3组细胞采用Western Blot与RT-PCR分别检测EphrinB2、VEGF、CD105、MMP9蛋白及mRNA的表达水平;用流式细胞仪检测各组细胞周期变化,用Transwell实验检测各组细胞侵袭能力的变化,用划痕实验测定各组细胞运动能力,MTT实验检测各组细胞的增殖率。结果:结肠癌SW480细胞中EphrinB2表达水平最高;用293T细胞外筛实验结果提示:含Psilencer2.1-E376干扰序列的质粒干扰效果最好(EphrinB2蛋白表达量显著减少);成功将沉默效果明显的pSilencer2.1-EphrinB2-shRNA376转染至SW480细胞,流式细胞仪测细胞凋亡百分比CON组(1.97±0.47)及NC组(1.74±0.36)较RNAi组(26.69±0.66)明显降低(P<0.05);建立稳定转染细胞株;与CON组、NC组比较RNAi组SW480细胞EphrinB2、VEGF、CD105、MMP9的蛋白及mRNA表达水平均明显下降(P<0.05),而CON组与NC组比较差异无显著性(P>0.05);流式细胞仪检测细胞S期细胞百分比RNAi组(18.32±0.38)较CON组(25.22±0.89)及NC组(24.34±1.26)明显降低(P<0.05),G1期细胞百分比RNAi组(74.49±1.55)较CON组(55.98±1.66)及NC组(57.78±2.22)明显增高(P<0.05);Transwell实验结果显示:RNAi组穿膜细胞数量(37.33±5.51)较CON组(109±4.36)及NC组(102±4.58)明显减少(P<0.05);划痕实验结果显示:RNAi组迁移距离(18.33±0.71)较CON组(32.7±1.25)及NC组(30.57±1.36)明显缩短(P<0.05);MTT实验结果显示:RNAi组细胞增殖水平较CON组及NC组明显降低(P<0.05)。结论:RNAi干扰技术能有效沉默EphrinB2基因。沉默EphrinB2基因可明显降低SW480细胞中EphrinB2蛋白和mRNA的表达,增加细胞凋亡,体外实验证实沉默EphrinB2基因抑制了结肠癌SW480细胞的肿瘤血管生成,增殖、侵袭、迁移。EphrinB2可能通过调控VEGF和MMP9在结直肠癌中发挥促进肿瘤血管生成和侵袭、转移的作用。
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全文目录
英汉缩略语名词对照 5-7 摘要 7-10 ABSTRACT 10-13 前言 13-16 1 材料和仪器、设备 16-25 2 方法 25-39 3 结果 39-46 4 讨论 46-52 5 结论 52-53 参考文献 53-61 全文总结 61-62 文献综述 62-72 参考文献 67-72 致谢 72-73 攻读学位期间的主要研究成果 73-74
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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肠肿瘤 > 结肠肿瘤
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