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癌基因Wip1在UVC诱导的胶质瘤细胞损伤中的作用研究

作　者: 周朝阳
导　师: 赵洪洋
学　校: 华中科技大学
专　业: 外科学
关键词: p53 UVC 胶质瘤 细胞损伤 Wip1 抑制剂 迁移 侵袭
分类号: R739.41
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


第一部分p53-Wip1基因在胶质瘤细胞UVC诱导的细胞损伤反应中的作用目的利用紫外线C（Ultraviolet C, UVC）处理U251（突变型p53细胞）和U87MG细胞（野生型p53细胞），观察其对细胞增殖的影响，并测定两种细胞p53、bcl2、Wip1表达的变化，探讨其与胶质瘤细胞增殖变化间的关系，探究其潜在机制。方法利用0、1、5、25、50、100J/m2UVC处理U87MG和U251细胞，经CCK-8法观察UVC对两株细胞增殖能力的影响。以50J/m2UVC处理细胞，蛋白免疫印迹试验（Westernblot assay）测定不同时间点两株细胞内p53、bcl2、Wip1蛋白表达变化。数据用SPSS10.0软件进行统计学分析。结果UVC可降低胶质瘤细胞的增殖能力。UVC剂量为0~5J/m2时，U251和U87MG增殖率变化无差异；当其剂量为25~100J/m2时，UVC能够诱导U251细胞发生更严重的细胞损伤反应。50J/m2UVC处理72h后U251细胞较U87MG细胞的增殖能力下降更明显，第72h后U251细胞的增殖率为（36.13±1.13）%，而U87MG为（80.02±5.46）%。50J/m2UVC照射胶质瘤细胞后，p53、bcl2和Wip1蛋白表达水平随时间变化发生波动。在U251和U87MG细胞内， p53蛋白在24小时内持续上调， bcl2蛋白在24小时内也持续上调。U251内Wip1蛋白持续上调；U87MG内Wip1蛋白在紫外线照射后8小时内下调，到第24小时反跳性上调。结论UVC更容易诱导U251细胞发生损伤，U87MG能够抵抗UVC对细胞的损伤，这种现象与p53蛋白功能存在一定相关性，同时，Wip1在UVC诱导的细胞损伤中也可能发挥了一定作用。第二部分Wip1抑制剂协同UVC抑制胶质瘤细胞体外恶性行为的研究目的利用Wip1抑制剂CCT007093处理U251和U87MG细胞，观察其对细胞增殖的影响，联合CCT007093及UVC处理胶质瘤细胞，测定两种细胞内p53、Wip1、p38、p-p38蛋白以及Wip1mRNA表达的变化，探讨其与细胞增殖、迁移和侵袭能力之间的关系及机制。方法利用0、5、25、50、100、200μM CCT007093处理U87MG和U251细胞，经CCK-8法测定CCT007093对两株细胞增殖的影响。单纯使用50μM CCT007093（或联合UVC）处理胶质瘤细胞。Westernblot测定细胞内p53、Wip1、p38、p-p38蛋白表达变化。实时定量聚合酶链反应（real time quantity PCR, RT-Q-PCR）测定Wip1mRNA水平。划痕迁移试验（Scratch migration assay）测定细胞迁移能力，Transwell侵袭试验（Transwell invasion assay, Transwell）检测细胞侵袭能力。数据用SPSS10.0软件进行统计学分析。结果CCT007093可有效降低胶质瘤细胞（特别是U87MG）的增殖能力。以50μMCCT007093处理经50J/m2UVC照射的胶质瘤细胞，U251及U87MG细胞内p53蛋白在第8小时达到高峰，第24小时明显下调；U251细胞内Wip1蛋白上调， U87MG细胞内Wip1蛋白持续下调；两株细胞中，p38及p-p38均逐渐下调。无论是单一因素还是联合运用UVC和CCT007093，U251细胞中Wip1mRNA表达下调，U87MG内Wip1的mRNA在8h内均明显上调。在单纯UVC和单纯CCT处理组中，处理后第24h U87MG细胞内Wip1mRNA水平较第8h均明显降低；而联合UVC和CCT处理时，其水平较第8h高，为对照组的（383.11±39.63）%。划痕迁移试验和Transwell侵袭试验显示，CCT007093能够协同UVC抑制胶质瘤细胞的迁移和侵袭能力。结论Wip1抑制剂CCT007093能够下调UVC诱导的野生型p53胶质瘤细胞Wip1蛋白过表达，协同UVC抑制胶质瘤细胞迁移、侵袭和增殖能力。

全文目录


摘要  5-7
  第一部分 p53-Wip1 基因在胶质瘤细胞 UVC 诱导的细胞损伤反应中的作用  5-6
  第二部分 Wip1 抑制剂协同 UVC 抑制胶质瘤细胞体外恶性行为的研究  6-7
Abstract  7-11
  Part Ⅰ The role of p53 and Wip1 genes in the cell injury induced by UVC in glioma cells  7-9
  Part Ⅱ Wip1 inhibitor contributes to the inhibition of glioma malignant induced by UVC in vitro  9-11
前言  11-13
  参考文献  12-13
第一部分 p53-Wip1 基因在胶质瘤细胞 UVC 诱导的细胞损伤反应中的作用  13-24
  1 材料和方法  13-18
  2 结果  18-19
  3 讨论  19-21
  4 结论  21-22
  参考文献  22-24
第二部分 Wip1 抑制剂协同 UVC 抑制胶质瘤细胞体外恶性行为的研究  24-40
  1 材料和方法  24-28
  2 结果  28-35
  3 讨论  35-37
  4 结论  37
  参考文献  37-40
综述  40-51
  参考文献  45-51
缩略词表  51-53
致谢（一）  53-54
致谢（二）  54

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 神经系肿瘤 > 颅内肿瘤及脑肿瘤
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