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水甘油通道蛋白9在非酒精性脂肪肝中作用的研究

作　者: 蔡璨
导　师: 姜政
学　校: 重庆医科大学
专　业: 内科学
关键词: 非酒精性脂肪肝水甘油通道蛋白9 甘油
分类号: R575.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：水甘油通道蛋9（aquaglyceroporin-9，AQP9）作为细胞膜上的甘油转运通道已被广泛认识，但对其在非酒精性脂肪肝（Non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）发生发展过程中所发挥的作用所知甚少。我们利用慢病毒（lentivirus）相关RNA干扰技术，通过下调高脂饮食诱导的NAFLD大鼠模型肝AQP9的表达，抑制肝脏对甘油的吸收作用，探索AQP9在NAFLD发生发展过程中所产生的生理效应。方法：将6-7周龄雄性SD大鼠随机分为4组：正常组、高脂组、对照组和转染组，每组5只。其中，正常组大鼠用普通饮食喂养8周，高脂组、对照组及转染组大鼠用高脂饮食喂养8周。后3组大鼠在高脂饮食喂养前一天，通过肝门静脉注射转染方式，分别予以等量的PBS溶液、lentivirus-scramble及lentivirus-shRNA-AQP9。8周后处死全部大鼠，运用蛋白免疫印迹（Western blot)、组织免疫组化及实时荧光定量PCR（Real time-PCR, RT-PCR）技术，检测各组大鼠AQP9蛋白和mRNA在肝脏中的表达情况；通过肝组织切片HE染色和油红O染色，以及测定肝组织内甘油和甘油三酯（Triglycercide, TG）含量，检测各组大鼠肝细胞中脂质沉积情况。结果：Western blot及RT-PCR实验结果表明，与高脂组及对照组相比，转染组大鼠肝脏AQP9蛋白及mRNA表达量明显减少；组织免疫组化结果提示，转染组大鼠肝实质细胞膜上AQP9蛋白的表达较高脂组及对照组明显下降；肝组织切片HE染色及油红O染色结果显示，转染组大鼠肝细胞内TG沉积量与高脂组及对照组相比，均显著减少；试剂盒测定各组大鼠肝细胞内甘油及TG含量，结果表明转染组明显低于高脂组及对照组。结论：重组慢病毒lentivirus-shRNA-AQP9转染大鼠后，成功下调肝细胞AQP9蛋白及mRNA的表达水平。抑制AQP9表达，能够减少肝细胞对甘油的转运，并减轻高脂饮食诱导NAFLD的肝细胞内脂质沉积量，即肝细胞脂肪变性程度，提示AQP9在肝细胞脂肪变性以及NAFLD发生发展过程中起着重要作用。

全文目录

符号说明  5-7
摘要  7-9
ABSTRACT  9-11
前言  11-13
第一部分构建重组慢病毒lentivirus-shRNA-AQP99  13-38
  1 材料和方法  13-30
  2 结果  30-36
  3 讨论  36-38
第二部分构建 NAFLD 大鼠模型及相关的实验研究  38-58
  1 材料和方法  38-46
  2 结果  46-55
  3 讨论  55-58
全文总结  58-59
参考文献  59-64
文献综述  64-72
  参考文献  69-72
致谢  72-73
攻读硕士学位期间发表的论文  73-74

水甘油通道蛋白9在非酒精性脂肪肝中作用的研究

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