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日本七鳃鳗免疫方案的建立及抗血清杀伤活性的鉴定

作　者: 乔旭
导　师: 李庆伟
学　校: 辽宁师范大学
专　业: 细胞生物学
关键词: 日本七鳃鳗可变淋巴细胞受体免疫方案抗血清适应性免疫系统
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

在针对适应性免疫系统起源与进化的探究中,现存的无颌类脊椎动物的代表一七鳃鳗因其独特的进化地位及特有的适应性免疫系统从而受到了免疫学家的高度关注,继而成为这一研究领域中的新型模式生物。随着生物系统发生的进行,以哺乳动物为代表的有颌类脊椎动物通过天然免疫系统和适应性免疫系统的协同作用来完成对外界抗原刺激的免疫应答。其中以免疫球蛋白(Immunoglobulin, Ig)、T/B淋巴细胞表面受体(TCR/BCR)和主要组织相容性复合物(MHC)为代表免疫球蛋白超家族(Immunoglobulin superfamily,IgSF)成员,赋予了适应性免疫应答所特有的复杂性、专一性和记忆性。2004年Pancer Z等学者经研究证实,在无颌类脊椎动物七鳃鳗中存在一种独特的、由可变淋巴细胞受体(variable lymphocyte receptors,VLRs)介导的适应性免疫系统。目前已经证实在七鳃鳗体内存在三类VLR分子—VLRA、VLRB及VLRC;当机体受到外源微生物刺激后,只有VLRB＋淋巴细胞会发生增殖并分化成浆细胞,分泌可溶性VLRB分子参与免疫应答。由此可见,七鳃鳗拥有独特的、唯一一种不依赖于免疫球蛋白的适应性免疫体系,对该免疫系统作用机理的的探究,将为解开适应性免疫系统起源及进化这一由来已久的谜团提供关键线索。遗憾的是,目前在七鳃鳗免疫研究领域仍缺少一套标准化的免疫方案,不仅造成了七鳃鳗免疫流程中抗原制备、免疫方式、免疫时间等相关因素的不确定性,更阻碍了后续抗血清活性及VLR免疫应答体系的研究。为解决这一问题,本研究运用多种抗原免疫日本七鳃鳗(Lampetra japonica),分别为大肠杆菌(Escherichia coli, E. coli),变形杆菌(Bacillus proteus, B. proteus),耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis, M. smegmatis)金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus, S. aureus);兔红细胞(RRBCs),绵羊红细胞(SRBCs);肿瘤细胞NB4、HepG2及Hela。采取腹腔注射及肌肉注射两种免疫途径,每十天进行一次免疫,共免疫4次,随后采集七鳃鳗抗血清。此外,作者对七鳃鳗抗血清的杀菌及溶细胞活性进行了进一步的探究,为针对七鳃鳗体内VLR介导的适应性免疫系统的研究提供基础,从而进一步推动脊椎动物适应性免疫系统起源及进化的相关研究。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-8
第1章绪论  8-17
  1.1 日本七鳃鳗的系统发育及解剖学特征  8-9
  1.2 从基于Ig的适应免疫系统到VL介导的适应性免疫体系的发现  9-14
    1.2.1 无脊椎动物及植物的先天性免疫应答分子  9-10
    1.2.2 Ig介导的适应性免疫系统概述  10-11
    1.2.3 七鳃鳗可变淋巴细胞受体(VLR)的发现及功能初研  11-12
    1.2.4 七鳃鳗体内VLRA~+及VLRB~+淋巴细胞的发育场所  12-13
    1.2.5 七鳃鳗体内两类淋巴细胞之间潜在的的协同作用探究  13-14
  1.3 脊椎动物适应性免疫系统的起源与进化  14-17
第2章不同剂量大肠杆菌(E. coli)免疫日本七鳃鳗方案  17-22
  2.1 材料及方法  17-19
    2.1.1 七鳃鳗及E. coli菌株  17
    2.1.2 不同剂量大肠杆菌(E. coli)免疫日本七鳃鳗实验方案  17
    2.1.3 七鳃鳗抗血清的制备  17-18
    2.1.4 七鳃鳗抗血清杀菌活性测定  18-19
  2.2 结果  19-20
  2.3 讨论  20-22
第3章日本七鳃鳗腹腔注射及肌肉注射的免疫效果比较  22-26
  3.1 材料及方法  22-24
    3.1.1 绵羊红细胞(SRBCs)和肝癌细胞(HepG2)免疫方案及抗血清制备  22-24
    3.1.2 绵羊红细胞(SRBCs)和肝癌细胞(HepG2)免疫抗血清的溶细胞活性鉴定  24
  3.2 结果  24-25
  3.3 讨论  25-26
第4章多种抗原免疫日本七鳃鳗方案的建立  26-34
  4.1 材料及方法  26-31
    4.1.1 多种抗原免疫方案及抗血清制备  26-27
    4.1.2 七鳃鳗抗血清溶细胞活性检测  27-31
  4.2 结果  31-32
  4.3 讨论  32-34
第5章影响七鳃鳗抗血清杀伤作用的关键因素—抗血清剂量、反应时间及孵育温度  34-40
  5.1 材料及方法  34-36
    5.1.1 七鳃鳗抗血清剂量对其溶血活性的影响  34-35
    5.1.2 孵育温度对七鳃鳗抗血清溶血活性影响  35
    5.1.3 反应时间对七鳃鳗抗血清溶血活性的影响  35-36
  5.2 结果  36-38
  5.3 讨论  38-40
第6章七鳃鳗抗血清与相应抗原的凝集反应检测  40-44
  6.1 材料及方法  40-41
    6.1.1 免疫方案及抗血清制备  40-41
    6.1.2 抗血清与相应抗原的凝集实验  41
  6.2 结果  41-42
  6.3 讨论  42-44
第7章结论  44-45
本论文的创新点  45-46
参考文献  46-48
攻读硕士学位期间发表学术论文情况  48-49
致谢  49

日本七鳃鳗免疫方案的建立及抗血清杀伤活性的鉴定

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