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以冬凌草提取物为主成分的局部抗菌外用药的研究

作　者: 陈姗
导　师: 梁菊
学　校: 河南科技大学
专　业: 药理学
关键词: 冬凌草 抗菌 提取物 外用霜剂 抗感染
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


近年来滥用抗生素使多种细菌产生耐药性，新型抗菌药物的研发刻不容缓。因中药的抗菌机理特殊，不易使细菌耐药，因此中药抗菌制剂已成为医药学界的研究热点。冬凌草，为唇形科香茶属多年生草本植物，又名冰凌草。主产于河南、河北等地，其中济源所产的冬凌草品相俱佳。常用于治疗炎症和疼痛。现代研究发现冬凌草提取物有较好的抗菌活性，其中冬凌草甲素与冬凌草乙素为主抗菌成分，对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌及绿脓杆菌均具有明显抑制作用。冬凌草产品现有片剂、滴丸、胶囊剂、注射剂等多种剂型，但局部抗菌外用制剂的研发却未见报道。本课题旨在以冬凌草提取物为主药，设计研发一种局部抗菌外用制剂。其具体研究工作主要包括以下几个部分：1.对冬凌草有效抗菌成分的提取分离工艺进行研究。利用80%乙醇总提取、系统溶剂萃取、硅胶柱层析分离，结果如下，总浸膏得率为5.29%，氯仿部位提取率为1.23%，氯仿部位浸膏含冬凌草甲素3.3%。冬凌草甲素提取率为0.042%。2.对各部位的抗菌活性进行比较研究及最小抑菌浓度（MIC）的测定。其中氯仿部位抗菌活性最强，其对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、苏云杆菌及耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）均有明显的抗菌活性，其MIC分别为0.78mg/mL、0.78mg/mL、0.39mg/mL及1.56mg/mL。冬凌草甲素能抑制MRSA的生长，且MIC为0.0625mg/mL。3.外用药物制剂的透皮吸收效果不仅取决于药物本身，还很大程度上受透皮促渗剂的影响。为了优化外用霜剂的配方工艺，通过体外透皮实验对氮酮与青刺果油、乳木果油进行促渗效果比较研究，发现青刺果油的透皮促渗效果最佳。4.以二甲基硅油、液体石蜡、青刺果油、甘油等作为辅料制备含药5%的冬凌草局部抗菌外用霜剂。选用豚鼠进行该霜剂的急性皮肤刺激性实验及局部抗感染实验。结果发现，无论是正常皮肤还是破损皮肤，涂药两周后均无红肿、脱皮等症状，表明其安全无刺激。向豚鼠皮下接种金黄色葡萄球菌建立模型。处理部位出现红肿、轻触痛叫，取皮肤组织检测为金黄色葡萄菌感染，表明造模成功。定时定量给药7d后，红肿消失，注射点愈合，再取皮肤组织检测无病原体感染，表明该霜剂有较好的局部抗感染效果。5.用杜洛克小型猪进行烧伤皮肤的局部抗感染实验。向烫斑下接种MRSA建立模型，烫斑部位肿胀，有脓性物渗出，取组织检测为MRSA感染则表明造模成功。连续给药12d后，消肿消失，烫斑软化，取皮肤组织观察感染细菌数量逐渐减少。检测指标显示：与对照组相比，样品组在治疗1-4d后SOD含量显著升高，MDA降低，IL-6降低。而生长因子及内毒素含量变化均不明显。

全文目录


摘要  2-4
ABSTRACT  4-10
第1章 绪论  10-16
  1.1 冬凌草简介  10
  1.2 冬凌草化学成分  10-12
    1.2.1 冬凌草甲素与乙素  10-12
  1.3 冬凌草药理作用及临床应用  12-14
    1.3.1 药理作用  12-13
    1.3.2 临床应用  13-14
  1.4 冬凌草产品现状  14-15
  1.5 中药抗菌制剂的优势  15
  1.6 本论文立题思路  15-16
第2章 冬凌草抗菌成分提取工艺研究  16-20
  2.1 引言  16
  2.2 主要材料及仪器  16
  2.3 总提与萃取工艺  16-17
    2.3.1 80%乙醇总提取  16-17
    2.3.2 萃取分离  17
  2.4 硅胶柱层析纯化  17
    2.4.1 装填柱子  17
    2.4.2 制备样品  17
    2.4.3 湿法上样与梯度洗脱  17
  2.5 提取工艺实验结果  17-20
    2.5.1 总提与萃取工艺浸膏得率  17-18
    2.5.2 硅胶柱层析各梯度洗脱浸膏得率  18
    2.5.3 冬凌草甲素总提取率  18-20
第3章 提取物与冬凌草甲素体外抑菌作用的比较研究  20-27
  3.1 引言  20
  3.2 主要实验材料  20-21
    3.2.1 实验材料  20
    3.2.2 实验对象  20-21
  3.3 实验方案  21-23
    3.3.1 LB 液体培养基配制  21
    3.3.2 LB 固体培养基  21
    3.3.3 细菌的纯化  21
    3.3.4 细菌的保存  21
    3.3.5 细菌的复苏  21-22
    3.3.6 体外抑菌实验  22
    3.3.7 MIC 测试实验  22-23
    3.3.8 冬凌草甲素对 MRSA 生长曲线的抑制作用  23
  3.4 实验结果  23-27
    3.4.1 抑菌效果实验结果  23-24
    3.4.2 最小抑菌浓度（MIC）实验结果  24-25
    3.4.3 冬凌草甲素抑制细菌生长曲线绘制  25-27
第4章 外用制剂透皮促渗剂筛选  27-31
  4.1 引言  27
  4.2 实验部分  27-29
    4.2.1 主要试剂及仪器  27-28
    4.2.2 透皮促渗剂的筛选实验  28-29
  4.3 实验结果  29-30
    4.3.1 体外透皮实验结果  29-30
  4.4 本章小结  30-31
第5章 动物水平的药效学评价  31-41
  5.1 引言  31
  5.2 急性皮肤刺激性实验  31-32
    5.2.1 主要实验材料  31-32
    5.2.2 实验方案  32
    5.2.3 实验结果与讨论  32
  5.3 局部正常皮肤抗感染实验  32-33
    5.3.1 主要实验材料  32
    5.3.2 实验方案  32-33
    5.3.3 实验结果  33
  5.4 局部烧伤皮肤抗感染实验  33-40
    5.4.1 主要实验材料及仪器  33-34
    5.4.2 实验方案  34-35
    5.4.3 血样处理方法  35
    5.4.4 皮肤组织块处理方法  35
    5.4.5 痂下皮肤组织细菌计数方案  35
    5.4.6 实验结果  35-40
  5.5 本章小结  40-41
第6章 结论  41-43
参考文献  43-46
缩略语词汇表  46-47
致谢  47-48
攻读硕士学位期间的研究成果  48

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学
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