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凉血散血方治疗免疫性血小板减少症阴虚血热证疗效观察及免疫调节机制的研究

作　者: 张旻昱
导　师: 蒋文明
学　校: 湖南中医药大学
专　业: 中西医结合临床
关键词: 免疫性血小板减少症 凉血散血方 疗效观察 作用机制 CD4~+CD25~+调节性T细胞 叉头状蛋白3 白细胞抗原分化群40分子配体
分类号: R259
类　型: 博士论文
年　份: 2014年
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内容摘要


目的：探讨凉血散血方对免疫性血小板减少症(immune thrombocytopenia, ITP)阴虚血热证患者临床疗效,以及对CD4+CD25+调节性T (Treg)细胞及相关因子的影响；同时通过动物实验研究该方对于ITP的作用机制。方法：①临床研究：将60例ITP阴虚血热证患者,随机分为中药治疗组,西药对照组,分别予凉血散血方,强的松治疗3个月,对治疗前后患者中医证候疗效、中医各症状积分、西医临床疗效、外周血小板数、CD4+CD25+Treg细胞及FOXP3表达进行比较。②实验研究：将大鼠随机分为空白组、模型组、强的松组、凉血散血方高、中、低剂量组,用腹腔注射兔抗大鼠血小板血清(APS)法复制ITP模型,用流式细胞术测定CD4+CD25+Treg细胞及Foxp3水平,通过免疫组化法、RT-PCR法及western-blotting法测定Foxp3mRNA及Foxp3蛋白表达并进行比较。用酶联免疫吸附法(ELISA)测定大鼠外周血CD40L的变化,并进行比较。结果：①临床研究：凉血散血方可提高患者中医证候疗效,对中医各症状均有明显改善(P<0.01)。在提升血小板数量方面,凉血散血方组与强的松组比较无显著性差异(P>0.05)。两组病人CD4+CD25+Treg细胞及FOXP3表达方面治疗前后比较均有显著性差异(P<0.05)。②实验研究：Foxp3主要表达在细胞核上,模型组CD4+CD25+Treg细胞及Foxp3水平,Foxp3mRNA及Foxp3蛋白表达明显低于空白组,CD40L水平明显高于空白组,两组相比较有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,各治疗组CD4+CD25+Treg细胞及Foxp3水平升高(P<0.01和P<0.05)；各药物组Foxp3mRNA及Foxp3蛋白表达均升高,CD40L水平降低(P<0.01和P<0.05)；凉血散血方高剂量组与强的松组比较无统计学意义(P>0.05)。结论：①凉血散血方能有效提升ITP阴虚血热证患者血小板数量和改善出血症状,作用机制可能通过增加FOXP3表达,加强CD4+CD25+Treg细胞的免疫抑制功能,发挥对ITP的治疗作用。②凉血散血方可能通过下调CD40L的过度表达,加强Foxp3表达,增加CD4’CD25+细胞表达,增强Treg细胞的免疫抑制功能,使外周血小板破坏减少。

全文目录


中文摘要  10-12
Abstract  12-15
缩略词表  15-16
第一部分 临床部分  16-36
  第一 凉血散血方治疗ITP的疗效观察  16-30
    1 研究方案  16-19
      1.1 诊断标准  16-18
      1.2 病例纳入标准  18
      1.3 病例排除标准  18-19
      1.4 病例剔除标准  19
      1.5 中止标准  19
      1.6 病例脱落处理  19
    2 研究方法  19-21
      2.1 病例来源  19
      2.2 病例选择与分组  19-20
      2.3 药物  20-21
      2.4 治疗原则  21
      2.5 用药方法  21
      2.6 疗程  21
    3 观测指标  21-22
      3.1 安全性观察指标  21-22
      3.2 疗效观察指标  22
    4 疗效判定标准  22-23
      4.1 西医疗效判定标准  22
      4.2 中医证候疗效判定标准  22-23
    5 统计学分析  23
    6 结果  23-30
      6.1 LSD组与强的松组中医证候疗效比较  23
      6.2 LSD组与强的松组中医症状积分比较  23-27
      6.3 LSD组与强的松组西医临床疗效比较  27-28
      6.4 LSD组与强的松组治疗前后血小板计数比较  28-29
      6.5 LSD组与强的松组治疗后不良反应比较  29-30
  第二 凉血散血方对ITP患者CD4~+CD25~+Treg细胞及FOXP3表达的影响  30-36
    1 研究对象  30
    2 临床用药  30
    3 观测指标  30
    4 研究方法  30-32
      4.1 标本的收集与处理  30
      4.2 仪器与试剂  30-31
      4.3 样本制备  31
      4.4 流式细胞分析  31-32
    5 统计学处理  32
    6 结果  32-36
      6.1 LSD组与强的松组治疗前后外周血CD4~+CD25~+Treg细胞及FOXP3表达比较  32-34
      6.2 治疗前后CD4~+CD25~+Treg细胞、FOXP3表达及其与外周血小板计数间多元逐步回归分析  34-36
第二部分 实验研究  36-61
  第一 兔抗大鼠血小板血清(APS)制备  36-38
    1 动物  36
    2 试剂  36
    3 主要溶液配制  36
    4 仪器  36
    5 方法  36-38
  第二 凉血散血方对ITP模型大鼠体征、血小板及骨髓象的影响  38-44
    1 动物与材料  38-39
      1.1 动物  38
      1.2 药物与试剂  38
      1.3 主要溶液配制  38
      1.4 主要仪器  38-39
    2 实验方法  39-40
      2.1 动物模型的复制  39
      2.2 分组和给药  39-40
      2.3 观察大鼠体征改变  40
      2.4 取材  40
      2.5 血小板检测  40
      2.6 大鼠股骨骨髓象观察  40
      2.7 统计学分析  40
    3 结果  40-44
      3.1 各组大鼠体征改变  40-41
      3.2 各组大鼠血小板计数  41-42
      3.3 大鼠股骨骨髓象变化  42-44
  第三 凉血散血方对ITP模型大鼠外周血CD4~+CD25~+Treg细胞及Foxp3表达的影响  44-57
    1 动物与材料  44-47
      1.1 动物  44
      1.2 药物与试剂  44-45
      1.3 主要溶液配制  45-46
      1.4 主要仪器  46-47
    2 实验方法  47-52
      2.1 动物模型的建立  47
      2.2 分组和给药  47
      2.3 取材  47
      2.4 流式细胞仪检测大鼠外周血CD4~+CD25~+Treg细胞及Foxp3表达  47-48
      2.5 免疫组化法检测ITP模型大鼠脾脏Foxp3蛋白表达  48-49
      2.6 RT-PCR法检测ITP模型大鼠脾脏Foxp3mRNA表达  49-50
      2.7 Western-blot法检测ITP模型大鼠脾脏Foxp3蛋白表达  50-52
      2.8 统计学分析  52
    3 结果  52-57
      3.1 凉血散血方对流式检测的CD4~+CD25~+Treg细胞及Foxp3表达的影响  52-54
      3.2 凉血散血方对免疫组化法检测的Foxp3蛋白表达的影响  54
      3.3 凉血散血方对RT-PCR法检测的Foxp3mRNA表达的影响  54-55
      3.4 凉血散血方对Western-blotting法检测的Foxp3蛋白表达的影响  55-57
  第四 凉血散血方对ITP模型大鼠外周血CD40L表达的影响  57-61
    1 动物与材料  57
      1.1 动物  57
      1.2 药物与试剂  57
      1.3 主要溶液配制  57
      1.4 主要仪器  57
    2 实验方法  57-58
      2.1 动物模型的建立  57
      2.2 分组和给药  57
      2.3 取材  57-58
      2.4 ELISA法检测ITP模型大鼠外周血CD40L表达  58
      2.5 统计学分析  58
    3 结果  58-61
      3.1 凉血散血方对ELISA法检测的CD40L表达的影响  58-60
      3.2 各组ITP大鼠CD40L、Foxp3表达及其与外周血小板计数间多元逐步回归分析  60-61
第三部分 讨论  61-80
  第一 临床研究讨论  61-72
    1 中医对免疫性血小板减少症的认识  61-62
      1.1 古代医家的认识  61-62
      1.2 现代医家的认识  62
    2 中、西医治疗免疫性血小板减少症的现状  62-64
      2.1 中医药治疗免疫性血小板减少症的现状  62-63
      2.2 现代医学治疗免疫性血小板减少症现状  63-64
    3 凉血散血方组方依据及方解  64-67
      3.1 凉血散血方单味药选用依据  64-65
      3.2 凉血散血方义分析  65-67
    4 凉血散血方治疗免疫性血小板减少症的疗效分析  67-69
      4.1 中医证候疗效评价  67-68
      4.2 西医临床疗效评价  68
      4.3 不良反应的比较  68-69
    5 凉血散血方对ITP患者CD4~+CD25~+Treg细胞及FOXP3表达的影响  69-71
      5.1 CD4~+CD25~+Treg细胞与ITP发病  69-70
      5.2 FOXP3因子与ITP发病  70-71
    6 小结  71-72
  第二实验研究讨论  72-80
    1 免疫性血小板减少症发病机制的研究现状  72-74
      1.1 ITP发病与特异性免疫应答  72-74
      1.2 ITP发病与固有免疫应答  74
    2 中医药治疗免疫性血小板减少症作用机制的进展  74-76
      2.1 减少抗血小板抗体的产生  74-75
      2.2 减少巨噬细胞吞噬血小板作用  75
      2.3 促进巨核细胞成熟  75
      2.4 调节T、B淋巴细胞免疫功能  75-76
    3 凉血散血方治疗免疫性血小板减少症的作用机制  76-79
      3.1 凉血散血方对ITP模型大鼠体征、血小板及骨髓象的影响  76
      3.2 凉血散血方对ITP模型大鼠CD4~CD25~+Treg细胞及Foxp3表达的影响  76-77
      3.3 凉血散血方对ITP模型大鼠外周血CD40L表达的影响  77-79
    4 小结  79-80
结论  80-81
致谢  81-82
参考文献  82-89
附录A 文献综述  89-103
  参考文献  99-103
附录B 临床观察表  103-117
附录C 流式分析图片  117-120
附录D 骨髓细胞形态学分析图片  120-121
附录E 免疫组化图片  121-122
附录F RT-PCR分析图片  122-123
附录G 读博期间主要研究成果及发表论文  123

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中医内科 > 现代医学内科疾病
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