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不同倍性泥鳅（Misgurnus anguillicaudatus）鳍细胞系的建立及特性分析

作　者: 马辰
导　师: 李霞
学　校:
专　业: 海洋生物学
关键词: 泥鳅 细胞系 多倍体 生物学特性
分类号: S966.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2014年
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内容摘要


采用组织块培养法启动二倍体、三倍体和四倍体泥鳅鳍组织细胞原代培养，胰蛋白酶消化法传代，目前二倍体、三倍体和四倍体细胞已经分别传至84代、75代和68代。三种细胞均为成纤维细胞样细胞。鳍组织无菌处理方法是：先用质量浓度为10%的碘伏浸泡15min；后用青霉素和链霉素的混合液（500IU/mL青霉素，500μg/mL链霉素）浸泡30min；原代培养和早期传代培养所用的培养基为DMEM/F12，添加体积分数为20%的胎牛血清、10ng/mL人碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、20ng/mLI型胰岛素样生长因子（IGF-I）以及10μg/mL硫酸软骨素。30代以后所用培养基为20%FBS-DMEM/F12。细胞培养在25℃、5%CO2培养箱中。对培养的二倍体、三倍体和四倍体细胞进行染色体分析，特征染色体数目分别为50、75和100，同时进行了微卫星实验确定培养的细胞系为二倍体、三倍体和四倍体泥鳅鳍细胞系，分别命名为：DIMF、TRMF和TEMF。在以上培养条件下，二倍体、三倍体和四倍体的倍增时间分别为48.43h、36.01h和41.45h；测定的二倍体、三倍体和四倍体细胞及核的体积比分别为1:1.37:2.37和1:1.53:1.97；细胞经液氮冷冻保存60d后，解冻复苏后测定存活率分别为（80.88±1.38）%，（84.48±1.13）%，（81.57±1.28）%。培养至60代以后的二倍体和三倍体细胞染色体未出现变异，特征染色体数目仍为50和75，而四倍体细胞染色体出现变异，特征染色体数目变为96。不同倍性的泥鳅细胞系的建立丰富了鱼类细胞系的种类，为揭示多倍体鱼类生长、遗传等机制打下基础。

全文目录


摘要  3-4
Abstract  4-5
目录  5-7
第一章 文献综述  7-13
  1.鱼类细胞培养方法  7-8
    1.1 鱼类原代培养方法  7
    1.2 鱼类细胞培养常用培养基及添加物  7-8
    1.3 鱼类细胞体外培养条件的优化与建系方法  8
  2.鱼类细胞系建系意义及其应用  8-11
    2.1 鱼类细胞系在病毒学中的应用  9
    2.2 鱼类细胞系在遗传学中的应用  9-10
    2.3 鱼类细胞系在环境毒理学中的应用  10
    2.4 鱼类细胞系在鱼类肿瘤研究中的应用  10
    2.5 鱼类细胞系在种质资源中的应用  10-11
  3.鱼类细胞系建立的研究进展及展望  11-12
    3.1 国外鱼类细胞系建立状况  11
    3.2 国内鱼类细胞系建立状况  11
    3.3 展望  11-12
  4.本论文的研究目的及意义  12-13
第二章 不同倍性泥鳅鳍细胞系的建立及鉴定  13-23
  1.材料与方法  13-16
    1.1 材料  13-14
      1.1.1 实验材料  13
      1.1.2 实验仪器  13
      1.1.3 实验试剂  13-14
    1.2 方法  14-16
      1.2.1 原代培养  14
      1.2.2 传代培养  14
      1.2.3 细胞保存  14-15
      1.2.4 染色体分析  15
      1.2.5 微卫星试验  15-16
  2.结果  16-20
    2.1 原代培养  16
    2.2 传代培养及细胞系的建立  16-17
    2.3 细胞保存  17
    2.4 染色体分析  17-19
    2.5 微卫星试验  19-20
  3.讨论  20-21
    3.1 泥鳅鳍细胞系建立方法  20-21
    3.2 泥鳅鳍细胞染色体分析  21
    3.3 微卫星实验  21
  4.本章小结  21-23
第三章 不同倍性泥鳅鳍细胞系生物学特性分析  23-34
  1.材料与方法  23-25
    1.1 材料  23-24
      1.1.1 实验材料  23
      1.1.2 实验仪器  23
      1.1.3 实验试剂  23-24
    1.2 方法  24-25
      1.2.1 生长曲线测定  24
      1.2.2 细胞大小及细胞核大小测定  24
      1.2.3 细胞系的遗传稳定性  24
      1.2.4 病毒感染实验  24-25
      1.2.5 数据处理  25
  2.结果  25-31
    2.1 生长曲线测定  25-26
    2.2 细胞大小及细胞核大小  26-27
      2.2.1 细胞大小  26
      2.2.2 细胞核大小  26-27
    2.3 细胞系的遗传稳定性  27-29
    2.4 病毒感染实验  29-31
      2.4.1 两种病毒对三种细胞系的感染实验  29-30
      2.4.2 SVCV 在三种细胞系上的滴度测定  30-31
      2.4.3 对细胞系繁殖的 SVCV 的收获、滴度测定  31
  3.讨论  31-32
    3.1 细胞大小及增殖情况比较  31
    3.2 细胞系的遗传稳定性  31-32
    3.3 病毒敏感性  32
  4.本章小结  32-34
结论  34-35
参考文献  35-40
攻读硕士期间发表的学术论文目录  40-43
致谢  43

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中图分类: > 农业科学 > 水产、渔业 > 水产养殖技术 > 其他水产养殖 > 黄鳝、泥鳅养殖
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