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肝癌细胞系中肿瘤干细胞样细胞的初步研究

作　者: 魏植强
导　师: 郑秋红
学　校: 福建医科大学
专　业: 肿瘤学
关键词: 肝癌 癌干细胞样细胞 免疫磁珠分选法 miRNA基因芯片 差异表达
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


目的:肝癌是我国常见的恶性肿瘤,目前的研究显示肝癌可能来源于癌干细胞。本实验包含三个方面的内容:⑴从肝癌细胞系PLC/PRF-5中分离、鉴定癌干细胞样细胞亚群。⑵研究肝癌细胞系PLC/PRF-5中ABCG2的表达和成瘤的关系。⑶应用miRNAs芯片筛选肝癌细胞系PLC/PRF-5差异表达miRNAs,为进一步研究其在肝癌发病机制中的作用打下基础。方法:⑴应用流式细胞仪检测ABCG2+在肝癌细胞系PLC/PRF-5中的表达,应用免疫磁珠分选（MACS）法对肝癌细胞系PLC/PRF-5进行ABCG2+细胞与ABCG2-细胞的分选,流式细胞仪鉴定分离的纯度,观察ABCG2+细胞与ABCG2-细胞的增殖及软琼脂克隆形成能力。将分选的ABCG2+细胞与ABCG2-细胞分别以5×103、1×104、5×104、5×105个密度接种于NOD/SCID小鼠腋窝下,6周后处死小鼠观察成瘤率。⑵应用mirVana RNA Isolation Kit法抽提ABCG2+细胞和ABCG2-细胞的总RNA,利用基因芯片技术,将细胞miRNA与哺乳动物miRNA芯片杂交,采用Agilent Scan Control software version A.7.0和Agilent Feature Extraction （FE） software version 9.5进行数据分析。结果:⑴对肝癌细胞系PLC/PRF-5进行流式细胞仪检测,ABCG2+细胞比例在5.58～17.10%。将肝癌细胞系PLC/PRF-5中分选出的ABCG2+细胞用流式细胞仪检测,其纯度为80%以上。生长曲线显示肝癌细胞系PLC/PRF-5中ABCG2+细胞体外增殖能力明显强于ABCG2-细胞（P<0.05）。软琼脂克隆形成能力实验中ABCG2+细胞比ABCG2-细胞形成更多更大的克隆集落（P<0.05）。⑵NOD/SCID小鼠成瘤实验显示, ABCG2+细胞组在1×104个细胞时可以成瘤,而ABCG2-细胞组最少需要5×105个细胞。在相同的接种量下（5×105个细胞）,ABCG2+细胞组的肿瘤体积均大于ABCG2-细胞组。⑶miRNA芯片结果显示,ABCG2+细胞与ABCG2-细胞表达的miRNA中有20个存在明显差异（fold change〉2.0）,其中13个上调表达和7个下调表达。结论:肝癌细胞系PLC/PRF-5中ABCG2+细胞具有肿瘤干细胞的特性:自我更新能力、无限增殖能力、更强克隆形成能力和更强的致瘤性。

全文目录


第一部分 肝癌细胞系中肿瘤干细胞样细胞的初步研究  4-36
  中文摘要  4-5
  英文摘要  5-7
  引言  7-9
  材料  9-11
  方法  11-18
  结果  18-25
  讨论  25-31
  参考文献  31-35
  致谢  35-36
第二部分 肝癌干细胞及相关研究进展  36-43
  综述  36-41
  参考文献  41-43

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肝肿瘤
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