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沙门氏菌检测试剂盒与设备应用研究

作　者: 姚玉婷
导　师: 肖明
学　校: 上海师范大学
专　业: 微生物学
关键词: 沙门氏菌免疫功能化磁珠免疫功能化量子点磁性富集
分类号: TS207.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

近些年来,食品安全已成为全球关注的热点。由微生物污染所引起的食源性疾病是食品安全问题中不容忽视的一点。食源性致病菌的检测是食源性疾病预防和控制的关键节点。随着科技的进步,食品检测技术在不断朝着准确化、效率化、多元化的方向发展。纳米技术是近年来出现的一门高新技术,在生物化学、分子生物学、细胞生物学、基因组学、蛋白质组学、医学诊断、药物筛选和细菌检测标记等方面有着广泛的应用。本研究以现行的食品安全国家标准沙门氏菌检验(GB/T4789.4-2010)和地方标准(DB31/T455-2009)为基础,构建了沙门氏菌磁珠富集、量子点标记的可视化筛选检验检测试剂盒,并对试剂盒的生产工艺、质量控制标准、验证方法等进行了研究。制备得到的沙门氏菌检测试剂盒中包括：以Fe3O4为核心,外层包裹二氧化硅,带有氨基,连接有兔抗沙门氏菌多克隆抗体的免疫功能化磁珠,连接有兔抗沙门氏菌多克隆抗体的免疫功能化量子点,Buffer1(pH=6.0)和Buffer2(pH=7.2)。本研究对试剂盒的生产进行了质量控制,确定了免疫功能化磁珠的最佳粒径、最佳浓度、最佳加液量和使用次数。该试剂盒对沙门氏菌的最低检测限为103CFU/mL,在4℃下可保存三个月,性状稳定,检测结果可靠。实验结果显示该试剂盒能特异性检测沙门氏菌,实现对沙门氏菌的可视化筛选检测。同时本研究设计了一种生物样品磁富集仪BN10-CXY-1,可大大缩短检测时问,快速免疫浓缩纯化大容量样品中的沙门氏菌。与沙门氏菌荧光量子点筛选分离试剂盒配合使用可实现生物样品的大容量、自动化检测,提高灵敏度,满足食品安全领域快速检测的要求。

全文目录

摘要  3-4
Abstract  4-8
第一章绪论  8-19
  1 沙门氏菌检测技术的发展  8-14
    1.1 沙门氏菌的危害  8-9
    1.2 沙门氏菌检测技术  9-14
  2 纳米技术的应用  14-17
    2.1 免疫功能化磁性纳米粒子  14-15
    2.2 免疫功能化量子点  15-16
    2.3 免疫磁性分离—量子点标记技术(IMS-QDs)  16-17
  3 本论文的研究目的和意义  17-19
第二章沙门氏菌检测试剂盒的制备与质量控制  19-28
  1 实验材料  19-20
    1.1 试剂  19-20
    1.2 主要仪器  20
  2 实验方法  20-22
    2.1 氨基化磁珠的制备  20-21
    2.2 纳米磁珠的免疫功能化  21-22
    2.3 量子点的免疫功能化  22
    2.4 Buffer的制备  22
  3 结果与分析  22-27
    3.1 氨基化磁珠的表征  22-24
    3.2 免疫功能化磁珠的合成和表征  24-26
    3.3 免疫功能化量子点的表征  26-27
    3.4 Buffer1和Buffer2的制备  27
  4 实验小结  27-28
第三章沙门氏菌检测试剂盒的装配与流程控制  28-37
  1 实验材料  28-29
    1.1 试剂  28
    1.2 实验菌株  28
    1.3 主要仪器  28-29
  2 实验方法  29-30
    2.1 菌株培养  29
    2.2 免疫功能化磁珠浓度的优化  29
    2.3 分离试剂加液量的研究  29-30
  3 结果与分析  30-36
    3.1 免疫功能化磁珠最优浓度的研究  30-31
    3.2 分离试剂最优加液量的研究  31-32
    3.3 试剂盒组分说明  32-34
    3.4 试剂盒操作流程的确立  34-36
  4 实验小结  36-37
第四章沙门氏菌检测试剂盒的质量指标与控制  37-48
  1 实验材料  37-38
    1.1 试剂  37
    1.2 实验菌株  37
    1.3 主要仪器  37-38
  2 实验方法  38-41
    2.0 菌株培养  38
    2.1 试剂盒特异性研究  38-39
    2.2 试制盒检测限研究  39
    2.3 稳定性及有效期的研究  39-40
    2.4 试剂盒均匀性研究  40
    2.5 实样检测  40-41
  3 结果与分析  41-46
    3.1 试剂盒的特异性  41-42
    3.2 试剂盒的检测限  42-43
    3.3 试剂盒的稳定性及有效期  43-44
    3.4 试剂盒的均匀性  44-45
    3.5 实样检测结果  45-46
  4 实验小结  46-48
第五章生物样品磁富集仪研究  48-54
  1 实验材料  48-50
    1.1 试剂  48
    1.2 实验菌株  48-49
    1.3 主要仪器  49-50
  2 实验方法  50-51
    2.1 菌株培养  50
    2.2 磁富集性能研究  50-51
    2.3 实验性验证  51
  3 结果与分析  51-53
    3.1 磁富集性能研究  51-52
    3.2 验证结果与报告  52-53
  4 实验小结  53-54
总结  54-55
致谢  55-56
参考文献  56-62
主要科研成果  62-65
附件  65

沙门氏菌检测试剂盒与设备应用研究

内容摘要

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