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壳聚糖降解真菌的分离鉴定及其对香蕉枯萎病的生物防治

作　者: 刘昌燕
导　师: 黄俊生
学　校: 海南大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 壳聚糖酶淡紫拟青霉 ITS序列香蕉枯萎病生物防治
分类号: S436.68
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 159次
引　用: 3次
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内容摘要

壳聚糖是地球上含量丰富的天然高分子碳水化合物,在工业、农业、医药和环保等各个领域都有应用,但它的不溶性成为其广泛应用于生产上的制约因素。而壳聚糖酶的降解产物壳寡糖具有更好的水溶解性、独特的生物活性和生理功能,倍受研究者的关注。本论文主要从以下几个方面进行了研究：从广东、海南等地采集的142份土样,采用壳聚糖为唯一碳源和氮源的培养基进行筛选,共获得363株真菌。对香蕉枯萎病菌进行抑菌效果测定,获得一株抑制效果较好的菌株,编号为080409-13。对峙培养法测定该菌株对香蕉枯萎病菌的抑制率为60.74%；用不同浓度的发酵滤液测定该菌株对香蕉枯萎病菌的抑制作用结果表明,抑制作用随着浓度的升高而升高,终浓度为5%的发酵滤液对香蕉枯萎病菌的抑制率为62.00%,且表现出明显的后续作用；盆栽防治效果表明,在107个／mL的孢子原液的50×稀释液条件下,拮抗真菌080409-13对香蕉枯萎病防治效果最好,为83.34%。菌株080409-13经形态学观察和ITS序列分析,鉴定为淡紫拟青霉。生物学特性测定结果表明：适合该菌株生长的温度范围为5-40℃,最适生长温度为29℃；080409-13菌株有较好的pH耐受性,在pH值4-10的范围内均可以生长。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-6
目录  6-9
1 前言  9-22
  1.1 壳聚糖研究概况  9-10
    1.1.1 壳聚糖简介  9
    1.1.2 壳聚糖的应用  9
    1.1.3 壳聚糖的降解途径  9-10
  1.2 壳聚糖酶研究  10-14
    1.2.1 壳聚糖酶的发现  10
    1.2.2 壳聚糖酶的来源  10-12
    1.2.3 壳聚糖酶的分离纯化  12
    1.2.4 壳聚糖酶的性质  12-14
  1.3 壳聚糖酶及其降解产物的应用  14-17
    1.3.1 壳聚糖酶在植物病害防治中的应用  14-15
    1.3.2 壳聚糖降解产物即壳寡糖的应用  15-17
  1.4 香蕉枯萎病的危害及防治  17-21
    1.4.1 香蕉枯萎病的发生与危害  17-18
    1.4.2 香蕉枯萎病的防治研究  18-19
      1.4.2.1 检疫  18
      1.4.2.2 栽培管理  18-19
      1.4.2.3 香蕉枯萎病的化学防治  19
    1.4.3 香蕉枯萎病的抗病育种  19-20
    1.4.4 香蕉枯萎病的生物防治  20-21
  1.5 本研究的目的和意义  21-22
2 壳聚糖降解真菌的分离筛选及其对香蕉枯萎病的防治  22-32
  2.1 实验材料与方法  22-25
    2.1.1 实验材料  22-23
      2.1.1.1 实验菌株  22
      2.1.1.2 实验土样  22
      2.1.1.3 实验药品  22
      2.1.1.4 培养基  22-23
    2.1.2 实验方法  23-25
      2.1.2.1 透明圈法筛选  23
      2.1.2.2 拮抗作用的测定  23
      2.1.2.3 拮抗真菌发酵滤液对病原菌生长的影响  23-24
      2.1.2.4 拮抗真菌对香蕉枯萎病的盆栽防治效果测定  24
      2.1.2.5 数据处理  24-25
  2.2 结果与分析  25-30
    2.2.1 壳聚糖酶产生菌的平板筛选结果  25
    2.2.2 拮抗真菌080409-13对香蕉枯萎病菌的抑制作用  25-26
    2.2.3 拮抗真菌080409-13对其他枯萎病菌的抑制作用  26-27
    2.2.4 拮抗真菌080409-13发酵滤液对香蕉枯萎病菌的抑制效果  27-28
    2.2.5 拮抗真菌080409-13对香蕉枯萎病的盆栽防治效果  28-30
  2.3 结论与讨论  30-32
    2.3.1 壳聚糖酶产生菌的分离筛选方法  30
    2.3.2 壳聚糖酶产生菌对香蕉枯萎病的生物防治  30-32
3 筛选菌080409-13的初步鉴定及其生物学特性研究  32-42
  3.1 实验材料与方法  32-35
    3.1.1 实验材料  32
      3.1.1.1 实验菌株  32
      3.1.1.2 主要实验仪器  32
    3.1.2 实验方法  32-35
      3.1.2.1 菌株080409-13的菌落形态观察  32
      3.1.2.2 菌株080409-13的菌丝及孢子显微镜观察  32-33
      3.1.2.3 基因组DNA的提取  33
      3.1.2.4 PCR引物设计  33-34
      3.1.2.5 PCR扩增ITS序列  34
      3.1.2.6 测序  34
      3.1.2.7 080409-13 菌株菌落生长速度的测定  34
      3.1.2.8 温度对080409-13菌株生长速率和产孢量的影响  34-35
      3.1.2.9 初始pH对080409-13菌株生长速率和产孢量的影响  35
      3.1.2.10 数据处理  35
  3.2 结果与分析  35-40
    3.2.1 080409-13 菌株的形态特征  35-36
    3.2.2 080409-13 菌株基因组DNA的提取  36
    3.2.3 ITS序列的PCR扩增  36-37
    3.2.4 测序结果  37-38
    3.2.5 温度对080409-13菌株生长的影响  38
    3.2.6 温度对080409-13菌株产孢量的影响  38-39
    3.2.7 pH对080409-13菌株生长的影响  39
    3.2.8 pH对080409-13菌株产孢量的影响  39-40
  3.3 结论与讨论  40-42
    3.3.1 菌株080409-13的形态特征和ITS序列分析  40-41
    3.3.2 培养条件对菌株080409-13的影响  41-42
4 结论  42-43
参考文献  43-50
致谢  50

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