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黄鳝白蛋白的分离纯化与性质研究

作　者: 迟婷婷
导　师: 张英霞
学　校: 海南大学
专　业: 海洋生物学
关键词: 黄鳝白蛋白分离纯化胰蛋白酶抑制剂多克隆抗体蛋白质印迹
分类号: Q51
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

白蛋白(albumin)是脊椎动物血浆中含量最丰富的一种蛋白,其主要功能在于结合及转运内源性和外源性等多种物质,如水、离子、脂肪酸、激素、代谢产物及药物等,并能够维持渗透压。为研究黄鳝(Monopterus albus)皮肤功能与白蛋白之间的关系,从黄鳝血清和皮肤中分别分离纯化得到白蛋白,进行了性质鉴定及免疫学检测。通过阴离子交换层析和凝胶过滤层析,从黄鳝血清中得到其血清白蛋白,命名为MAA-serum (M. albus Albumin from serum)分子量67kDa,为单链非糖蛋白,其N末端氨基酸序列为GHKKW。用0.5mg MAA-serum/只作为免疫源免疫大白兔,经3次免疫后,抽取大白兔血液,分离血清,进行饱和硫酸铵沉淀,获得抗MAA-serum的多克隆抗体。经ELISA方法测定该抗体与MAA-serum的免疫反应,抗体滴度为1：100,000。通过阴离子交换层析和凝胶过滤层析,从黄鳝皮肤中分离纯化得到一分子量为67kDa的蛋白质,经鉴定为单链非糖蛋白,其N-末端氨基酸序列为GHVKW。经ELISA检测该蛋白与抗MAA-serum有强烈的免疫反应,抗体滴度为1：100,000。经Western blot检测,该蛋白与抗MAA-serum也发生阳性反应,强度与MAA-serum相似,该蛋白为黄鳝皮肤白蛋白,命名为MAA-skin (M. albus Albumin from skin)。黄鳝皮肤中分布有大量白蛋白,推测其在黄鳝皮肤的水盐代谢、渗透压维持、呼吸,转运外界环境物质等有重要作用。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-8
1. 前言  8-18
  1.1 黄鳝的生理及药理特征  8-10
  1.2 血清白蛋白的性质及研究现状  10-15
  1.3 人血清白蛋白  15-18
2. 黄鳝白蛋白的分离纯化  18-25
  2.1 材料与方法  18-20
    2.1.1 材料  18
    2.1.2 黄鳝血清及皮肤匀浆物的制备  18-19
    2.1.3 黄鳝血清白蛋白(MAA-serum)的分离纯化  19
    2.1.4 黄鳝皮肤白蛋白(MAA-skin)的分离纯化  19-20
    2.1.5 Bio-Rad(微量)法定量蛋白质  20
    2.1.6 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳  20
  2.2 结果与讨论  20-25
    2.2.1 MAA-serum的分离纯化  20-22
    2.2.2 MAA-skin分离纯化  22-23
    2.2.3 Bio-Rad(微量)法定量蛋白质  23-25
3. MAA-serum和MAA-skin的性质鉴定  25-30
  3.1 材料与方法  25-26
    3.1.1 材料  25
    3.1.2 N-末端氨基酸序列测定  25
    3.1.3 辅基鉴定  25-26
    3.1.4 胰蛋白酶抑制剂活性测定  26
  3.2 结果与讨论  26-30
    3.2.1 N-末端氨基酸序列测定  26
    3.2.2 辅基鉴定  26-27
    3.2.3 胰蛋白酶抑制活性  27-30
4. 兔抗MAA-serum多克隆抗体制备及免疫学检测  30-37
  4.1 材料与方法  30-32
    4.1.1 材料  30
    4.1.2 兔抗MAA-serum多克隆抗体制备及纯化  30-31
    4.1.3 ELISA检测抗体效价及免疫交叉反应  31
    4.1.4 Western Blot实验  31-32
  4.2 结果与讨论  32-37
    4.2.1 抗体滴度  32
    4.2.2 MAA-serum及MAA-skin与抗体的免疫交叉反应  32-33
    4.2.3 Western Blot  33-37
结论  37-38
参考文献  38-44
附录  44-48
致谢  48-49
硕士期间发表的论文  49

黄鳝白蛋白的分离纯化与性质研究

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