学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

肺脏基质细胞分泌的VEGF对树突状细胞分化发育的影响

作　者: 王文文
导　师: 刘焕星
学　校: 泰山医学院
专　业: 内科学
关键词: 肺脏基质细胞 调节性树突状细胞 血管内皮生长因子 免疫耐受
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 18次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


树突状细胞(Dendritic cells,DC)不仅是最强的抗原递呈细胞(antigen presenting cells,APC),而且其本身还具有调节免疫反应强度、诱导免疫耐受的作用。机体是一个有机复杂的系统,各组分在各层面上相互作用共同维持机体内环境的稳态,免疫系统亦是如此。研究证实在脾脏、肝脏微环境都可诱导DC及造血前体细胞(hematopoietic stem cells,HSC)进一步增殖分化为具有免疫负向调控功能的调节性树突状细胞(regulatory DC,DCreg),并对其微环境中的各细胞、趋化因子对DC的影响机制做了阐述。我们前期研究发现,成熟树突状细胞(mature dendritic cells,mDC)在肺脏基质微环境中可被诱导分化发育为特殊表型的DCreg,且具有较弱的激活T细胞的能力,一定程度上可以降低免疫反应强度诱导免疫耐受,但是DCreg的具体诱导机制尚未明确。肺脏基质微环境由多种功能性支架细胞、趋化因子与细胞因子(VEGF,TGF-β,GM-CSF和PGE2等)等组成,它们是协调肺脏局部产生先天性免疫应答和获得性免疫应答的主要信息传递者,具有极其广泛的生物学活性;那么肺脏基质微环境的各细胞因子在DCreg的诱导分化过程中发挥了怎样的作用呢?在本项研究中,我们通过实验证实作为肺脏基质微环境中重要的细胞因子---血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)通过影响树突状细胞的表型CD86与NO的分泌表达参与了肺脏基质微环境对免疫细胞的诱导分化过程与肺脏免疫稳态维持。研究目的建立稳定的小鼠肺脏基质细胞系(murine pulmonary stmoral cells,MPSC),观察小鼠肺脏基质细胞分泌的细胞因子VEGF对成熟树突状细胞(mature dendritic cells,mDC)分化发育影响,并进一步探讨其对树突状细胞诱导免疫耐受的影响。方法通过小鼠肺脏组织细胞的原代培养建立稳定的成纤维样基质细胞系,并从细胞形态及特异性蛋白表达两方面给予鉴定,结论为原代培养的肺脏基质细胞具备成纤维样细胞的特点,可以模拟肺脏局部微环境;采用RT-PCR方法检测肺脏成纤维样基质细胞分泌的细胞因子:血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF),转化生长因子-β(transforming growth factor-beta,TGF-β),粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF),白介素10(IL-10)的表达水平。建立肺脏基质细胞培养上清液/树突状细胞(细胞浓度2×10~6)共培养体系作为对照组,向体系中加入含有浓度为(5μg/ml)的VEGF中和性抗体作为试验组,各自细胞培养一周。通过特异性夹心酶联免疫法(ELISA)检测两组细胞培养上清中细胞因子(IL-10和IL-12p70)的含量,流式细胞术检测DC细胞表型(CD86,CD11c,Ia)表达水平,Griess试剂检测体系中NO的分泌量,CCK-8法检测树突状细胞诱导同种异体T细胞的增殖能力,两组结果进行比较。结果VEGF中和抗体添加组诱导的DC与未添加抗体组DCreg相比较其表面细胞因子IL-10、IL-12p70表达差别无统计学意义(P>0.05),同样两组细胞诱导的T细胞增殖率无明显差别(P>0.05);VEGF中和抗体添加组诱导的DC其细胞表型CD86表达与未添加抗体组DCreg相比明显上调(P<0.05),而NO的表达却明显低于未添加抗体组DCreg(P<0.05)。结论我们通过细胞原代培养的的方法建立了稳定的肺脏基质细胞系;证明成熟树突状细胞并非终末细胞,它可以在肺脏基质微环境中分化发育DC新亚群--调节性树突状细胞(DCreg);肺脏基质细胞分泌的VEGF通过下调细胞表面共刺激分子CD86的表达与调节NO的分泌水平参与了DCreg诱导免疫耐受的过程。

全文目录


中文摘要  4-6
ABSTRACT  6-8
符号说明  8-9
前言  9-12
第一部分 肺脏基质细胞系的建立鉴定及VEGF 的分泌检测  12-24
  材料与方法  13-20
  实验结果  20-21
  讨论  21-24
第二部分 肺脏基质细胞来源的VEGF 对树突状细胞分化和功能的影响  24-39
  材料与方法  25-31
  实验结果  31-34
  讨论  34-39
结论  39-40
附图  40-46
参考文献  46-51
综述  51-59
  参考文献  56-59
致谢  59-60
攻读学位期间发表的学术论文  60

相似论文

  1. MMP-2、VEGF和Ki-67的表达与脑胶质瘤分级的相关性研究,R739.41
  2. 第三方骨髓间充质干细胞诱导同种异体移植受体免疫耐受机制的研究,R392
  3. Angiopoietin-1对高糖培养内皮细胞血管生成调控因子表达的影响,R587.2
  4. 慢病毒介导hVEGF-165基因转染骨髓间充质干细胞治疗大鼠后肢缺血实验研究,R329
  5. BMP2和VEGF165在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达,R329
  6. 急性髓系白血病中MT1FmRNA与VEGFmRNA的表达研究,R733.71
  7. TNF-α、MMP-9与VEGF在肺气肿大鼠BALF中的表达及其相互关系的探讨,R563.3
  8. 普萘洛尔对体外培养婴幼儿血管瘤内皮细胞VEGF、MMP-2的影响及意义,R739.5
  9. 联合检测外周血VEGF、MT与晚期肺癌疗效及预后判断的相关性研究,R734.2
  10. 血清及房水中VEGF、IL-6水平与新生血管性青光眼的相关性研究,R775
  11. 硅油填充继发青光眼患者前房液中生长因子含量变化的相关分析,R779.6
  12. 血管内皮生长因子对血管内皮细胞镁离子浓度的影响,R965
  13. 骨髓间充质干细胞在同种心脏移植中对Treg细胞作用的实验研究,R654.2
  14. 脂质体介导的VEGF-C siRNA治疗肺癌体外实验研究,R734.2
  15. 血管内皮生长因子转染骨髓基质干细胞复合支架治疗犬月骨缺血坏死,S858.292
  16. 血管内皮生长因子及地塞米松对肺泡Ⅱ细胞表达表面活性蛋白B和转化生长因子β1的影响及意义,R363
  17. 骨肉瘤肺转移与血管内皮生长因子和微血管密度关系的实验研究,R738.1
  18. IL-17对人非小细胞肺癌细胞体外表达VEGF的影响,R734.2
  19. 普萘洛尔治疗血管瘤机制的初步研究,R965
  20. 人体黑色素瘤中LPPCN与VM的关系及其调控机制的初步研究,R739.5
  21. 坎地沙坦对糖尿病大鼠视网膜VEGF、MCP-1蛋白表达的影响,R774.1

中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学免疫学
© 2012 www.xueweilunwen.com