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普萘洛尔治疗血管瘤机制的初步研究
作 者: 李锁
导 师: 鲁建云
学 校: 中南大学
专 业: 皮肤病与性病学
关键词: 普萘洛尔 血管瘤 内皮细胞 血管内皮生长因子 ERK信号通路
分类号: R965
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
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内容摘要
目的1.观察普萘洛尔对体外培养脐静脉内皮细胞(HUVEC-12细胞)细胞毒及增殖的影响。2.通过VEGF/ERK的胞内信号转导途径,探讨普萘洛尔治疗血管瘤的分子机制。方法1.采用不同浓度普萘洛尔干预内皮细胞,光学显微镜下观察细胞形态学变化;四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组细胞细胞毒及增殖情况;蛋白质免疫印迹(western blot)法测定磷酸化ERK变化。2.采用不同浓度VEGF刺激内皮细胞,应用蛋白质免疫印迹(western blot)法测定磷酸化ERK变化,建立内皮细胞VEGF阳性系统。3.采用不同浓度普萘洛尔干预经VEGF刺激的内皮细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组细胞细胞毒及增殖情况;蛋白质免疫印迹(western blot)法测定磷酸化ERK变化。4.在抑制剂干预研究中,应用ERK信号通路特异性抑制剂PD98059、普萘洛尔分别及联合处理经及未经VEGF刺激内皮细胞,观察内皮细胞细胞毒、增殖及磷酸化ERK的变化。结果1.普萘洛尔浓度在1-16ug/ml的范围内,对正常人血管内皮细胞安全、无细胞毒作用。2. VEGF在20ng/ml时内皮细胞磷酸化ERK表达最强,以此浓度建立内皮细胞VEGF阳性系统。3.与空白对照组相比,普萘洛尔对经VEGF刺激内皮细胞无细胞毒作用(P>0.05);在普奈洛尔浓度为8-16ug/ml时能明显抑制内皮细胞的增值及磷酸化ERK表达(P<0.05)4.与空白对照组比较,PD98059能明显抑制经VEGF刺激的内皮细胞增殖和降低磷酸化ERK水平;普萘洛尔具有PD98059相似效应,普萘洛尔与PD98059可能具有协同作用。结论普萘洛尔治疗血管瘤的机制可能为通过抑制(?)VEGF诱导的内皮细胞的胞内ERK信号转导,从而促进血管瘤的消退。
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全文目录
中文摘要 4-6 ABSTRACT 6-11 缩略词 11-12 第一章 前言 12-14 第二章 材料和方法 14-27 2.1 主要仪器及试剂 14-18 2.1.1 主要仪器及耗材 14-15 2.1.2 主要试剂 15-16 2.1.3 主要试剂配制 16-18 2.2 实验方法及步骤 18-26 2.2.1 细胞传代及培养 18 2.2.2 细胞冻存 18-19 2.2.3 细胞复苏 19 2.2.4 细胞计数 19-20 2.2.5 普萘洛尔干预内皮细胞 20-23 2.2.6 建立内皮细胞VEGF阳性系统 23 2.2.7 普萘洛尔干预VEGF刺激的内皮细胞 23-25 2.2.8 PD98059干预 25-26 2.3 统计学方法 26-27 第三章 结果 27-31 3.1 普萘洛尔对内皮细胞影响的测定 27-28 3.2 VEGF对内皮细胞的影响及内皮细胞VEGF阳性系统的建立 28 3.3 普萘洛尔对经VEGF刺激的内皮细胞影响的测定 28-29 3.4 PD98059干预对内皮细胞影响的测定 29-31 第四章 讨论 31-43 第五章 结论 43-44 参考文献 44-47 综述 47-57 参考文献 53-57 致谢 57-58 攻读学位期间主要的研究成果目录 58
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中图分类: > 医药、卫生 > 药学 > 药理学 > 实验药理学
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