学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示
PC-PLC调节神经炎性反应相关机制研究
作 者: 付吉花
导 师: 李府
学 校: 泰山医学院
专 业: 肿瘤学
关键词: 脂多糖 小胶质细胞 磷脂酰胆碱特异性磷脂酶C 炎性反应
分类号: R741
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
下 载: 26次
引 用: 0次
阅 读: 论文下载
内容摘要
目的小胶质细胞是中枢神经系统的固有免疫细胞,在各种神经系统疾病伴随的炎性反应中扮演着关键角色。因而研究小胶质细胞活化对神经系统炎性反应的损伤和修复有着重要的意义。实验中我们利用脂多糖激活小胶质细胞,研究其活化过程中炎性细胞因子的释放及其信号转导机制。磷脂酰胆碱特异性磷脂酶C(PC-PLC)是各种细胞中普遍存在的一种重要的酶,能特异性水解磷脂酰胆碱生成磷酸胆碱和二酯酰甘油,后者作为细胞内的第二信使,可进一步激活蛋白激酶C,进而将信号传递给丝裂原蛋白激酶,引起细胞增殖、分化和凋亡等多方面功能的改变。PC-PLC在神经系统发育和炎症反应的信号通路中具有重要作用。我们利用其特异性抑制剂D609研究PC-PLC调节小胶质细胞活化过程中的作用,为阐明PC-PLC在小胶质细胞活化过程中的作用机制提供实验证据,同时为临床上治疗神经系统疾病奠定理论基础。研究方法1.倒置显微镜下观察细胞形态变化2.小胶质细胞活化的检测1)倒置显微镜下观察细胞形态变化。2)ELISA检测炎性细胞因子TNF-а、IL-1β的活性,评价小胶质细胞的活化。3)利用硝酸还原酶法,检测炎性介质NO含量变化。3.利用PC-PLC特异性抑制剂D609,研究PC-PLC在小胶质细胞活化中的作用1)用MTT方法,检测D609的细胞毒性作用。2)PC-PLC活性检测。3)ELISA检测炎性细胞因子TNF-а、IL-1β的活性,来评价PC-PLC在小胶质细胞活化中作用4)利用硝酸还原酶法,检测炎性介质NO含量变化。4. PC-PLC在小胶质细胞活化中的作用机制1)用Western blot方法,检测p38 MAPK、JNK、ERK蛋白磷酸化水平。2)利用一氧化氮合酶(NOS)试剂盒,检测iNOS活性。结果1. BV2小胶质细胞培养通过倒置相差显微镜观察,BV2细胞成簇分布,胞体较小,胞浆浓缩,折光性强,清晰明亮。2. LPS可激活小胶质细胞2.1 LPS刺激BV2细胞形态学变化观察结果使用1μg/ml LPS处理BV2细胞24h,细胞形态出现明显变化,细胞胞体形态由正常的阿米巴样变为扁平状,胞体变大,较铺展,突起明显减少或者无突起,细胞多数悬浮。2.2 LPS能够有效的诱导小胶质细胞活化本研究用ELISA法检测发现1μg/ml LPS刺激BV2细胞24h后,处理组细胞产生并释放大量的炎性因子TNF-α,与正常对照细胞升高约10倍,差异显著(P<0.01)。炎性因子IL-1β升高2倍,差异显著(P<0.01)。2.3 LPS能够活化小胶质细胞,释放炎性介质NO本研究利用硝酸还原酶法检测BV2培养液中NO的含量,发现当用1μg/ml LPS刺激BV2细胞24h后,培养液中NO含量为28.14μmol/L,比正常对照组细胞的12.35μmol/L增高两倍,差异极为显著(P<0.01)。3. PC-PLC参与BV2小胶质细胞活化3.1 PC-PLC抑制剂D609对小胶质细胞的细胞毒性作用在有血清条件下,50-200μM的D609能够有效的抑制PC-PLC活性,且呈浓度依赖性。MTT法检测发现在有血清存在的条件下,10-100μM D609处理BV2细胞12-48h对细胞的存活率没有影响,而200μM D609处理BV2细胞24h和48h能够抑制细胞存活。因此,本研究中利用D609阻断PC-PLC活性的作用浓度为100μM。3.2 PC-PLC参与调节小胶质细胞活化中炎性细胞因子的释放本研究用ELISA法检测发现1μg/ml LPS能够活化BV2细胞24h后,产生并释放大量的炎性因子TNF-α和IL-1β。100μM D609预处理30min阻断PC-PLC活性,能够有效的抑制炎性因子TNF-α和IL-1β的释放。3.3 PC-PLC参与小胶质细胞活化中NO的释放本研究利用硝酸还原酶法检测BV2培养液中NO的含量,发现当用1μg/ml LPS刺激BV2细胞24h后,培养液中NO活性与正常对照组细胞相比显著升高。D609能够抑制由LPS诱导的NO释放。4. PC-PLC调节小胶质细胞活化作用机制4.1 PC-PLC通过调节SAPK/JNK和p44/42信号通路介导小胶质细胞的活化。使用1μg/ml LPS活化BV2细胞30min后,p38蛋白磷酸化不明显,而SAPK/JNK和p44/42蛋白磷酸化水平显著升高。用D609预处理阻断PC-PLC活性,能够抑制SAPK/JNK和p44/42的磷酸化。4.2 PC-PLC通过调节iNOS活性参与介导小胶质细胞的活化。研究结果表明1μg/ml LPS活化BV2细胞,细胞培养液中总的TNOS和诱导型iNOS活性显著升高(P<0.01),而结构型cNOS活性变化不明显。用D609预处理阻断PC-PLC活性,能够明显抑制iNOS活性的升高(P<0.01)。结论1. LPS可激活BV2小胶质细胞,实验组炎性细胞因子IL- 1β、TNF-α水平明显高于对照组。2. PC-PLC参与BV2小胶质细胞活化,利用PC-PLC特异性抑制剂D609,能够有效的抑制炎性因子TNF-α、IL-1β、NO的释放。3. PC-PLC通过调节iNOS活性,参与介导小胶质细胞的活化。4. PC-PLC通过调节激活SAPK/JNK和p44/42信号通路介导小胶质细胞的活化。
|
全文目录
中文摘要 5-8 ABSTRACT 8-12 符号说明 12-14 前言 14-25 1. 神经炎性反应 14 2. 小胶质细胞活化 14-22 3. 磷脂酰胆碱特异性磷脂酶 C 22-23 我们的工作及设想 23-25 第一章 小胶质细胞培养 25-33 前言 25-26 材料和主要仪器设备 26-28 实验方法 28-30 结果 30-31 讨论 31-32 附图 32-33 第二章 小胶质细胞活化诱导 33-44 前言 33-34 材料和主要仪器设备 34-36 实验方法 36-40 结果 40-41 讨论 41-42 附图 42-44 第三章 PC-PLC 在小胶质细胞活化中的调节作用研究 44-56 前言 44-45 材料和主要仪器设备 45-48 实验方法 48-51 结果 51-52 讨论 52-53 附图 53-56 第四章 PC-PLC 调节小胶质细胞活化作用机制探讨 56-68 前言 56-57 材料和主要仪器设备 57-62 实验方法 62-65 结果 65-66 讨论 66-68 附图 68-69 结论 69-70 参考文献 70-75 综述 75-86 参考文献 82-86 致谢 86
|
相似论文
- 鸭源鸡杆菌抗体消长规律研究及抗脂多糖单抗杂交瘤细胞株的建立,S858.32
- 稳定分泌抗羊种布鲁菌脂多糖单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立,R392
- 唾液酸近氨基端结构域功能及脂多糖对PRRSV诱导IFN-α的影响研究,S858.28
- 乌司他丁对体外循环心脏手术患者血浆S-100β蛋白及炎性因子的影响,R614
- 金钗石斛多糖减轻脂多糖诱导的大鼠学习记忆减退及机制研究,R285.5
- 小胶质细胞不同功能状态下MAPK信号通路变化及梓醇对其影响,R363
- 骨髓间充质干细胞的营养效应对一氧化碳致星形胶质细胞损伤的影响,R329
- EAN脑保护与脑损伤修复三细胞模型系统中的星形胶质细胞形态特征,R651.1
- 脊髓胶质细胞在蜜蜂毒诱致的疼痛与炎症中作用的研究,R741
- Caveolin-1蛋白在脑胶质瘤中的表达特点及意义,R739.4
- 糖基化终末产物对脂多糖介导下牙周膜干细胞生物学特性影响的研究,R781.4
- 脂多糖3年变化与新诊断2型糖尿病患者动脉粥样硬化演变之间的相关性研究,R543.5
- 脂多糖激活补体对内皮细胞的作用及抑制补体对脂多糖致急性肺损伤的影响,R563.8
- 褪黑素在细菌脂多糖引起胎鼠脑细胞钙超载中的神经保护作用,R722.1
- 锂离子对鸡胚发育及雏鸡认知功能的影响,S831.1
- 星型胶质细胞在不同接触状态下,CyclinA、CyclinD1与P27表达研究,R329
- 脂氧素A4调节人脐静脉内皮细胞通透性的机制初探,R363
- PARP-1对RAW264.7细胞内HMGB1的定位和分泌的影响,R576
- Shh信号传导途径在原代培养皮层星形胶质细胞氧化应激中的保护作用,R741
- Corilagin抑制照射后BV-2细胞炎症因子表达的体外研究,R730.5
- 阿司匹林诱生型脂氧素抑制脂多糖诱发的星形胶质细胞炎症反应,R965
中图分类: > 医药、卫生 > 神经病学与精神病学 > 神经病学
© 2012 www.xueweilunwen.com
|