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黄荆子乙酸乙酯提取物对翼状胬肉增殖的影响

作　者: 李兆瑞
导　师: 刘二华
学　校: 南华大学
专　业: 眼科
关键词: 翼状胬肉成纤维细胞黄荆子乙酸乙酯提取物增殖
分类号: R779.6
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

目的：观察黄荆子乙酸乙酯提取物（the acetoacetate extract ofVitex negundo seed,Evn-50）对于体外培养的人翼状胬肉成纤维细胞（human pterygium fiborblasts,HPF）增殖的影响，寻找药物辅助治疗和预防术后翼状胬肉复发的新途径。方法：取临床手术切除的人翼状胬肉标本无菌条件剪成1×1×1mm~3组织块，采用组织块双酶消化法（胰蛋白酶和胶原酶）原代培养人翼状胬肉成纤维细胞，传至第3或4代时，以抗α-SMA蛋白抗体行免疫荧光染色，结合细胞学形态鉴定为人翼状胬肉成纤维细胞。用0.25μg/ml、0.5μg/ml、1μg/ml、2μg/ml、4μg/ml的Evn-50作用于体外培养的HPF,同时设不加药的阴性对照组，48h后观察Evn-50对HPF细胞形态的改变，免疫荧光法检测HPF中细胞增殖核抗原（Ki-67）的变化，流式细胞仪测定细胞周期时相变化。结果：（1）体外培养的细胞倒置相差显微镜可见细胞形态一般为长梭形，胞核位于细胞中央，呈椭圆形；经免疫荧光染色后，α-SMA表达阳性，可以鉴定为成纤维细胞。（2）Evn-50作用48h后，流式细胞仪检测结果发现，随着Evn-50浓度增大，翼状胬肉成纤维细胞发生周期阻滞，大量的细胞停留在G0/G1期，而S期，G2/M期的细胞逐渐减少。计算其增殖率（S%+G2/M%），结果表明细胞增殖能力下降。（3）Evn-50作用48h后，免疫荧光法检测HPF中Ki-67表达发现当Evn-50的浓度在l-4μg/ml范围内能呈浓度依赖性地抑制HPF表达细胞增殖核抗原（Ki-67）(P<0.05)。结论:黄荆子乙酸乙酯提取物能抑制HPF的增殖，流式细胞仪检测显示Evn-50阻滞细胞在DNA合成前期（G0/G1期）。

全文目录

主要缩略语英汉对照表  4-5
中文摘要  5-6
Abstract  6-8
前言  8-10
材料仪器  10-12
  1.标本  10
  2.主要试剂  10
  3. 相关试剂的配置  10-11
  4.实验耗材  11
  5. 主要仪器  11-12
实验方法  12-16
  1 细胞培养  12-13
  2.翼状胬肉成纤维细胞(HPF)的鉴定  13-14
  3. Evn-50 对翼状胬肉成纤维细胞增殖与分化影响的检测  14-16
实验结果  16-19
  1.体外培养的 HPF 的生物学特性  16-17
  2.免疫荧光法鉴定 HPF  17
  3. Evn-50 对 HPF 增殖与分化的影响  17-19
附图及附表  19-25
讨论  25-28
结论  28-29
参考文献  29-32
综述  32-41
  参考文献  38-41
攻读硕士学位期间发表论文情况  41-42
致谢  42

黄荆子乙酸乙酯提取物对翼状胬肉增殖的影响

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