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大鼠内耳高增殖细胞的定量研究

作　者: 曾亮
导　师: 江红群
学　校: 南昌大学
专　业: 耳鼻咽喉头颈外科学
关键词: 年龄球囊斑椭圆囊斑耳蜗 Corti器高增殖细胞生长因子
分类号: R764
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

目的：探讨不同年龄及生长因子对于大鼠内耳高增殖细胞体外增殖的影响。方法：1．分离取出不同年龄即出生后1天(P1)，7天(P7)，14天(P14)，21天(P21)，30天(P30)，60天(P60)的SD大鼠各内耳器官：椭圆囊斑，球囊斑和耳蜗 Corti器，每个年龄段6只大鼠（12耳），总计72只大鼠（144耳），在无血清条件下进行单细胞悬浮细胞培养，至第七天，在倒置相差显微镜下对所形成的细胞球进行计数，对计数结果进行统计学分析；同时描绘出同种器官不同年龄SD大鼠形成细胞球的数量变化曲线；2．分离取出60只（120耳）出生后1天SD大鼠各内耳器官：椭圆囊斑，球囊斑和耳蜗Corti器，随机分为对照组和实验组，对照组不添加任何生长因子，选用上阶段实验数据，实验组分别添加EGF，bFGF，IGF-1，LIF，进行单细胞悬浮培养，至第八天，在倒置相差显微镜下进行细胞球计数，对计数结果进行统计学分析；3．免疫荧光染色检测细胞球的表型特征。结果：1．P1SD大鼠内耳各个器官单细胞nestin表现为阳性，培养7天后，可形成悬浮的细胞球，球体细胞免疫荧光表现为nestin和BrdU阳性；2．⑴各个内耳器官形成的细胞球数量：A.耳蜗Corti器：P1，P7大鼠单个Corti器可形成细胞球数分别为50±23个和33±15个，其差异有显著的统计学意义(P﹤0.05)。而在P14、P21、P30、P60大鼠所取细胞在相同条件下培养，未能观察到有细胞球形成；B.球囊斑：各个年龄段均观察到有细胞球形成，P1至P60单个球囊斑形成的细胞球数分别为23±9、21±8、16±6、14±4、13±3、12±3。P1与P7之间差异无统计学意义(P﹥0.05)，P1与其他各年龄段间差异有统计学意义(P﹤0.05)；P7与P14间差异无统计学意义(P﹥0.05)，P7与P21、P30、P60间差异有统计学意义(P﹤0.05)；P14、P21、P30、P60互相之间差异无统计学意义(P﹥0.05)。C.椭圆囊斑：各个年龄段均观察到有细胞球形成，P1至P60单个椭圆囊斑形成的细胞球数分别为29±10、24±9、21±6、18±4、15±4、14±5。P1与P7之间差异无统计学意义(P﹥0.05)，P1与其他各年龄段间差异有统计学意义(P﹤0.05)；P7与P14、P21间差异无统计学意义(P﹥0.05)，P7与P30、P60之间差异有统计学意义(P﹤0.05)；P14与P21间差异无统计学意义(P﹥0.05)，P14与P30、P60之间差异有统计学意义(P﹤0.05)；P21、P30、P60互相之间差异无统计学意义(P﹥0.05)。⑵同年龄段单个不同内耳器官所形成细胞球数之间的统计分析：①P1年龄段：耳蜗Corti器与球囊之间差异有统计学意义(P﹤0.05)，耳蜗Corti器与椭圆囊之间差异有统计学意义(P﹤0.05)，球囊与椭圆囊之间差异无统计学意义(P﹥0.05)；P7年龄段：耳蜗Corti器与球囊之间差异有统计学意义(P﹤0.05)，耳蜗Corti器与椭圆囊之间差异无统计学意义(P﹥0.05)，球囊与椭圆囊之间差异无统计学意义(P﹥0.05)；②P14、P21、P30、P60年龄段：P21大鼠的球囊斑和椭圆囊斑之间差异有统计学意义(P﹤0.05)，P14、P30、P60大鼠的球囊斑和椭圆囊斑之间差异无统计学意义(P﹥0.05)。3．添加了生长因子EGF、bFGF、IGF-1后，单个椭圆囊斑、球囊斑和耳蜗Corti器进行细胞培养，所形成的细胞球数量明显增多，与对照组比较，差异有显著统计学意义，而三组之间无差异；添加LIF组则球团数量增多不明显，与对照组比较提示差异无统计学意义。结论1．大鼠内耳前庭器官（球囊斑，椭圆囊斑）以及耳蜗（Corti器）内有高增殖能力细胞，能表达神经干细胞的特性；但随着鼠龄的增长，这种增殖能力总体趋势表现为减退；2．与前庭器官比较，耳蜗内高增殖细胞的增殖能力减退更快，但出生后1天的大鼠耳蜗内高增殖细胞的增殖能力更强，出生后14天大鼠耳蜗内未能发现高增殖细胞，同时还发现。前庭器官内高增殖细胞的增殖能力下降缓慢，持续至出生后60天仍可见高增殖细胞，球囊斑高增殖细胞减少主要集中在出生后第1天至21天，而椭圆囊斑高增殖细胞减少主要集中在出生后第1天至30天。除外出生后21天的大鼠，其他同年龄段两种前庭器官内高增殖细胞的增殖能力无差异；3．EGF、bFGF、IGF-1这三种生长因子均可单独促进出生后1天大鼠内耳高增殖细胞的增殖能力，但三者之间促增殖作用无差异，而LIF的促增殖作用不明显。

全文目录

摘要  3-5
ABSTRACT  5-11
第1章引言  11-13
第2章材料和方法  13-20
  2.1 实验材料  13-15
  2.2 实验方法  15-20
第3章结果  20-33
  3.1 细胞球的形态  20-21
  3.2 细胞球数量的增龄变化  21-25
  3.3 生长因子对形成细胞球数量的影响  25-28
  3.4 内耳器官培养细胞及所获细胞球的免疫荧光特性  28-33
第4章讨论  33-39
  4.1 干细胞治疗感音神经性耳聋  33-34
  4.2 内耳细胞及细胞球的干细胞特性  34-35
  4.3 增殖细胞增殖能力的增龄变化  35-36
  4.4 生长因子对于增殖细胞增殖的影响  36-37
  4.5 展望与问题  37-39
第5章结论  39-40
致谢  40-41
参考文献  41-44
攻读学位期间的研究成果  44-45
综述  45-51
  参考文献  49-51

大鼠内耳高增殖细胞的定量研究

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