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siRNA沉默Survivin对鼻咽癌细胞CNE2的影响

作　者: 黄新义
导　师: 郑家法
学　校: 南华大学
专　业: 耳鼻咽喉头颈外科
关键词: siRNA Survivin 鼻咽癌 Caspase-3 基因沉默
分类号: R739.63
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 2次
引　用: 0次
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内容摘要


目的:探讨siRNA沉默survivin基因表达对鼻咽癌细胞CNE2周期、增殖、凋亡及Caspase-3酶活性的影响，为鼻咽癌的基因治疗提供新的实验依据。方法：设计、合成两条不同特异性针对survivin基因的干扰序列a,b，将干扰序列构建至pGP/U6/GFP载体，经脂质体转染鼻咽癌细胞CNE2。采用流式细胞仪，检测细胞周期和细胞凋亡率；运用CCK-8试剂法，检测细胞的增殖；使用Caspase-3试剂盒，检测Caspase-3酶活性。结果：重组载体pGP/U6/GFP siRNA-Survivin a,b经基因测序鉴定，与设计干扰Survivin基因序列碱基插入方向一致，载体构建成功。siRNA沉默Survivin基因表达后，与空白对照组、阴性对照组比较，siRNA-Survivin a组、siRNA-Survivin b组细胞聚集在G0/G1期，G1期细胞增加，S期细胞减少（p﹤0.05）；与空白对照组比较siRNA-Survivin a组、siRNA-Survivin b组细胞增殖受到抑制（p﹤0.05），siRNA-Survivin b组与siRNA-Survivin a组比较，细胞增值受抑制更明显（p﹤0.05）； siRNA-Survivin b组凋亡率为（39.5％±0.79）高于空白对照组（2.65％±0.41）、脂质体组（3.25％±0.52）、阴性对照组（4.16％±0.62）及siRNA-Survivin a组（37.2％±0.71）（p﹤0.05）；Caspase-3酶活性检测表明，与空白对照组、阴性对照组比较，siRNA-Survivin a组、siRNA-Survivin b组Caspase-3酶活性增强（p﹤0.05）。结论：1. siRNA沉默Survivin基因表达后，可抑制鼻咽癌细胞CNE2增殖，促进细胞凋亡，对G0/G1期有阻滞作用。2. siRNA沉默Survivin基因表达后，鼻咽癌细胞CNE2中Caspase-3酶活性增强。3. Survivin基因不同靶点的siRNA，对鼻咽癌细胞CNE2的影响有显著性差异。

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 耳鼻咽喉肿瘤 > 咽肿瘤
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