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MiR-330在前列腺癌的抑癌作用及其机制研究

作　者: 茅叶青
导　师: 谢立平
学　校: 浙江大学
专　业: 外科学
关键词: microRNA-330 前列腺癌侵袭迁移 Sp1
分类号: R737.25
类　型: 博士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

背景：前列腺癌是目前男性最常见的肿瘤之一。在我国,其发病率在泌尿生殖系统肿瘤中逐年上升。目前,人们对前列腺癌的发病原因和进展机制所知甚少,除了常见的流行病学和遗传学因素,许多错综复杂的分子事件是导致肿瘤细胞形成、进展和转移的深层次原因。近年来的"MicroRNA热”为肿瘤领域的研究提供了新天地。作为一类小分子非编码RNA, microRNA在基因调控方面的强大功能已经为人们所公认,异常表达的microRNA常常与肿瘤发生、发展密切相关。目的：本研究首先考察了miR-330在前列腺癌细胞株中的表达情况,并以一系列细胞功能学实验展示了miR-330过表达在前列腺癌细胞中的生物学功能,最后根据生物信息学知识,对潜在的miR-330作用靶点进行验证,并通过靶点分子的沉默和过表达实验,证实miR-330对靶点的调控意义。方法：1.在前列腺癌细胞株和前列腺正常上皮细胞株进行miR-330的差异表达检测。检测Spl分子在上述细胞和人前列腺癌组织芯片中的表达情况,证明Spl它们在前列腺癌与癌旁组织中的表达差异；2.通过体外转染mimic的方式使细胞呈现miR-330过表达趋势,在此基础上,通过细胞活力分析实验(CCK-8)、流式细胞术、平板克隆形成、划痕实验以及Transwell实验,研究miR-330与的何种细胞功能有关；3.结合在线生物信息学工具,我们预测并挑选潜在的miR-330靶基因,构建荧光素酶报告系统对这些靶点进行验证,并利用Western Blot、RNA干扰和质粒过表达等实验进一步证实靶向调控关系。结果：1.在前列腺癌细胞株,miR-330都呈低表达,而Spl与之相反,为高表达,在组织芯片中,Spl在癌组织较癌旁组织呈高表达；2.通过对DU145和PC3细胞转染miR-330mimic,模拟miR-330过表达的状态,我们观察到细胞的存活率明显受到抑制,用50nM的mimic处理72小时后,DU145和PC3的抑制率分别达到20%和40%(p<0.05),且这种抑制效应有明显的时间和剂量依赖特征。流式细胞术显示miR-330mimic在作用72小时后能诱导细胞凋亡,DU145和PC3的凋亡率分别较对照组NC高出11%和14%(p<0.05)。miR-330对细胞周期无明显影响。用表达miR-330的慢病毒构建稳定表达miR-330的细胞株,用该稳定株做体外平板克隆形成实验,显示在体外miR-330过表达并不影响细胞的增殖能力。最后,划痕实验和Transwell小室实验则提示miR-330能显著地影响细胞的侵袭和迁移行为；3.根据生物信息学根据,我们预测miR-330可能的靶基因为MMP2、IGFR1和Spl。荧光素酶双报告系统和western实验证实Spl才是miR-330的直接作用靶点,对Spl实施特异性沉默和过表达进一步证实了其在miR-330在调控细胞侵袭和迁移过程中的作用；结论：1.miR-330在前列腺癌细胞中呈低表达,和Spl的表达趋势相反。2.过表达miR-330使得前列腺癌细胞DU145和PC3的侵袭和迁移能力下降,同时,还能诱导细胞的凋亡。3.Spl是miR-330的新靶基因,miR-330通过靶向Spl,影响MMP2/9的表达,抑制细胞的运动能力。

全文目录

致谢  5-6
中文摘要  6-8
Abstract  8-10
英文缩写一览表  10-12
引言  12-20
  参考文献  15-20
1. MIR-330和SP1在前列腺癌的表达情况  20-44
  1.1 前言  20-21
  1.2 材料与方法  21-32
  1.3 结果  32-36
  1.4 讨论  36-38
  1.5 结论  38
  1.6 参考文献  38-44
2. MIR-330对前列腺癌细胞增殖、凋亡、周期、侵袭和迁移的影响  44-66
  2.1 前言  44-45
  2.2 材料与方法  45-51
  2.3 结果  51-59
  2.4 讨论  59-62
  2.5 结论  62
  2.6 参考文献  62-66
3. MIR-330影响前列腺癌细胞运动的机制的研究  66-98
  3.1 前言  66-67
  3.2 材料与方法  67-79
  3.3 结果  79-89
  3.4 讨论  89-93
  3.5 结论  93
  3.6 参考文献  93-98
总结和展望  98-99
综述  99-126
  参考文献  114-126
作者简历及在读期间取得的科研成果  126-127

MiR-330在前列腺癌的抑癌作用及其机制研究

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