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miR-146b-3p对胰腺癌干细胞增殖的影响及机制研究

作　者: 林凡
导　师: 王欣
学　校: 华中科技大学
专　业: 普通外科
关键词: miR-146b-3p 胰腺癌干细胞增殖 Hedgehog信号通路
分类号: R735.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

目的：体外增强胰腺癌干细胞miR-146b-3p表达水平，观察该作用对胰腺癌干细胞增殖活性的影响并探讨其可能的作用机制。方法：运用芯片技术筛选胰腺癌干细胞和非干细胞的差异miRNAs。qPCR法验证差异性miRNAs在胰腺癌/癌旁组织中的表达。在高表达胰腺癌干细胞的MIAPaCa-2细胞和低表达胰腺癌干细胞的BxPC-3细胞中转染miR-146b-3p前体，增强miR-146b-3p表达水平，CFSE掺入法、Annexin Ⅴ/PI双标法、PI染色法检测细胞增殖、凋亡和周期分布的变化；检测凋亡相关蛋白和周期相关蛋白表达水平的变化；检测Hedgehog信号旁路MAP3K10→DYRK2→Gli2在mRNA水平和蛋白水平的表达变化，阐明MAP3K10是否受miR-146b-3p的转录后调控。利用PCR法和定点突变技术扩增基因组DNA人MAP3K10基因3′端非编码区，分别克隆到pGL3-Promoter荧光素酶报告基因载体得到pGL3-MAP3K10和pGL3-MAP3K10-mut质粒，利用荧光素酶双报告基因系统检测miR-146b-3p是否直接靶向MAP3K10。结果：筛查到胰腺癌干细胞特异性miRNAs谱，其中miR-146b-3p表达下降，差异性最大。包括miR-146b-3p在内共7条差异性miRNAs在胰腺癌组织中呈低表达。增强miR-146b-3p表达水平，CSC^highMIA PaCa-2细胞增殖能力下降，细胞凋亡率明显升高，细胞G0/G1期比例升高而S期比例下降，抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调而促凋亡蛋白Bax表达升高，周期相关蛋白P27表达上调，但对CSClowBxPC-3细胞的增殖能力无明显影响；Hedgehog信号旁路MAP3K10→DYRK2→Gli2在mRNA表达水平无明显变化，MAP3K10和Gli2的蛋白表达水平下降而DYRK2升高。细胞转染报告基因质粒pGL3-MA3K10和miR-146b-3p前体组与其他对照组比较，相对荧光素酶活性显著下降。结论：miR-146b-3p在胰腺癌干细胞和胰腺癌组织中呈低表达。增强miR-146b-3p表达，使胰腺癌干细胞增殖能力下降，其机制可能为转录后调控靶基因MAP3K10引起Hedgehog信号通路失调。

全文目录

摘要  5-7
ABSTRACT  7-9
缩略词表  9-10
前言  10-13
实验材料  13-16
实验方法  16-36
结果  36-50
讨论  50-53
参考文献  53-56
综述  56-65
  参考文献  62-65
附录  65-66
致谢  66

miR-146b-3p对胰腺癌干细胞增殖的影响及机制研究

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