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硫化氢促进肝癌细胞HepG-2对阿霉素的耐受性及机制

作　者: 银晓刚
导　师: 秦春宏
学　校: 南华大学
专　业: 普外科
关键词: 硫化氢 肝癌细胞 多药耐药性 KATP通道 BDNF-TrkB通路
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


【目的】建立以阿霉素（Adriamycin, ADM）杀伤肝癌细胞（HepG-2）为实验模型，探讨硫化氢（hydrogen sulfide, H2S）促进HepG-2细胞对ADM的耐受性及其机制。【方法】1.体外培养HepG-2细胞，予ADM、NaHS作用细胞，CCK8法检测ADM的IC50值。根据ADM的IC50值，设空白对照、ADM、ADM+NaHS、NaHS四组，流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡，Elisa法检测caspase-3蛋白表达。Western Blot检测NaHS对多药耐药性蛋白Bcl-2、P-gp的表达。了解H2S是否促进HepG-2细胞对ADM的耐受性。2.体外培养HepG-2细胞，予ADM、NaHS和Gly作用细胞，CCK8法检测ADM的IC50值。FCM检测空白对照、ADM、ADM+NaHS、ADM+NaHS+Gly、Gly五组的细胞凋亡。Western Blot检测空白对照、NaHS、NaHS+Gly、Gly四组中Bcl-2、P-糖蛋白的表达。了解KATP通道是否介导了H2S促进HepG-2细胞对ADM的耐受性。3.根据ADM的IC50值，设空白对照、ADM、ADM+NaHS、ADM+NaHS+K252a、K252a五组，分别采用CCK8法和FCM检测细胞活力及细胞凋亡。Western Blot检测空白对照、NaHS、NaHS+K252a、K252a四组中Bcl-2、P-糖蛋白的表达及NaHS对BDNF的表达。了解BDNF-TrKB通路是否介导了H2S促进HepG-2细胞对ADM的耐受性。【结果】1. H2S对HepG-2细胞中ADM的耐受性的影响1.1ADM的IC50值NaHS（100、200、400μmol/L）组ADM的IC50值分别为0.59±0.05mg/L、0.78±0.07mg/L、1.42±0.08mg/L，高于空白对照组（单独ADM处理，0.32±0.03mg/L）（P<0.01, P<0.001）。1.2细胞凋亡ADM组细胞凋亡率（77.9±0.9）%高于空白对照组（16.9±0.6）%（P<0.001）；ADM+NaHS组（25.7±2.3）%低于ADM组（77.9±0.9）%（P<0.001）；NaHS组细胞凋亡率（9.1±0.9）%低于空白对照组（16.9±0.6）%（P<0.01）。1.3Caspase-3表达ADM组Caspase-3蛋白表达水平（1.09±0.05ng/ml）高于空白对照组（0.53±0.03ng/ml）（P<0.001）； ADM+NaHS组Caspase-3蛋白表达水平（0.81±0.03ng/ml）低于ADM组（1.09±0.05ng/ml）（P<0.01）；对照组与NaHS组无明显差异（P＞0.05）。1.4Bcl-2、P-gp表达NaHS（100、200、400μmol/L）组Bcl-2的蛋白表达水平高于空白对照组（P<0.05, P<0.001）；NaHS（200、400μmol/L）组P-gp的蛋白表达水平高于空白对照组（P<0.01, P<0.001）。2. KATP通道对H2S促进ADM耐受性的介导作用2.1ADM的IC50值NaHS组ADM的IC50值（0.78±0.07mg/L）高于对照ADM组（0.32±0.03mg/L）（P<0.001）；NaHS+Gly组ADM的IC50值（0.58±0.01mg/L）低于NaHS组（0.78±0.07mg/L）（P<0.05）。2.2细胞凋亡率ADM组细胞凋亡率[（77.9±0.9）%]高于空白对照组（16.9±0.6）%（P<0.001）；ADM+NaHS组[（25.7±2.3）%]低于ADM组[（77.9±0.9）%]（P<0.001）；ADM+NaHS+Gly组[（50.5±3.9）%]高于ADM+NaHS组[（25.7±2.3）%]（P<0.01）；对照组与Gly组无明显差异（P＞0.05）。2.3Bcl-2、P-gp蛋白表达NaHS组Bcl-2、P-gp蛋白表达水平均高于空白对照组（P<0.05, P<0.01）；NaHS+Gly组Bcl-2、P-gp蛋白表达水平均低于NaHS组（P<0.05）；对照组与Gly组Bcl-2、P-gp蛋白表达水平无显著差异（P＞0.05）。3. BDNF-TrkB通路对H2S促进ADM耐受性的介导作用3.1BDNF蛋白表达NaHS（100、200、400μmol/L）组BDNF的蛋白表达水平高于空白对照组（P<0.05, P<0.001）。3.2细胞活力ADM组细胞活力（OD值：0.56±0.02）低于空白对照组（1.90±0.03）（P<0.001）； ADM+NaHS组细胞活力（1.39±0.09）高于ADM组（0.56±0.02）（P<0.001）；ADM+NaHS+K252a组细胞活力（0.71±0.01）低于ADM+NaHS组（P<0.001）；对照组与K252a组无明显差异（P＞0.05）。3.3细胞凋亡ADM组细胞凋亡率[（77.9±0.9）%]高于空白对照组[（16.9±0.6）%]（P<0.001）；ADM+NaHS组细胞凋亡率[（25.7±2.3）%]低于ADM组（77.9±0.9）%（P<0.001）；ADM+NaHS+K252a组[（46.0±5.9）%]高于ADM+NaHS组[（25.7±2.3）%]（P<0.05）；对照组与K252a组无明显差异（P＞0.05）。3.4Bcl-2、P-gp蛋白表达NaHS组Bcl-2、P-gp蛋白表达水平高于空白对照组（P<0.05，P<0.001）；NaHS+K252a组Bcl-2、P-gp蛋白表达水平低于NaHS组（P<0.05，P<0.01）；对照组与K252a组Bcl-2、P-gp蛋白表达水平无显著差异（P＞0.05）。【结论】1. H2S可促进HepG-2细胞对ADM的耐受性。2. KATP通道和BDNF-TrkB通路可能对H2S促进ADM的耐受性具有介导作用。3. H2S促进HepG-2细胞对ADM的耐受性，与上调Bcl-2、P-gp蛋白的表达有关，与KATP通道和BDNF-TrkB通路有关。

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肝肿瘤
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