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miR-155对乳腺癌中抑癌基因TPM1的抑制作用研究

作　者: 张忠举
导　师: 马世良
学　校: 沈阳农业大学
专　业: 动物学
关键词: miRNA miR-155 TPM1 乳腺癌
分类号: R737.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

miRNA是一类长约21～25个核苷酸的内源非编码单链小分子RNA，通过与其靶mRNA的3’非翻译区(3’UTR)相应靶位点碱基之间不完全或完全配对结合，引起靶mRNA的翻译抑制或降解，从而在转录后水平调节编码蛋白的mRNA表达。miRNA在多种生物学过程中，发挥着重要的调节作用，包括细胞周期、细胞增殖、分化、凋亡。自2002年以来，大量证据表明miRNA与肿瘤的发生有着极其密切的关系，广泛地参与多种类型癌症的发生、发展、侵袭和转移。近年来，关于其在乳腺癌中的作用同样受到广泛关注。高通量方法的运用，极大地促进了人们对miRNA在乳腺癌发生中的作用的认识。通过基因芯片技术，在乳腺癌发生发展的各个阶段都检测出大量异常表达的miRNA基因，比如miR-10b、miR-125b、miR-145等表达下调，而miR-21、miR-155等上调。然而，很多异常表达的miRNA在乳腺癌中的功能并不清楚。本课题通过生物信息学方法对乳腺癌中异常表达的miRNA进行筛选预测，发现TPM13’UTR存在miR-155潜在的靶点。利用报告基因等功能研究方法，进行初步鉴定，结果显示miR-155能够抑制报告基因的表达。本研究结果将为探明miR-155调控乳腺癌发生的机制提供实验依据。

全文目录

摘要  6-7
Abstract  7-8
前言  8-17
实验材料  17-20
  1．主要化学试剂  17-18
  2．细胞和质粒  18
  3．耗材  18
  4．TPM1 3’UTR 克隆引物与合成的小 RNA  18-19
  5．主要仪器  19
  6．软件及网络资源  19-20
实验方法  20-30
  1 TPM1 3’UTR 报告载体的构建  20-26
    1.1 目的片段的制备  20-23
    1.2 克隆载体的构建  23-25
    1.3 xba1 和 HpaI 双酶切反应  25
    1.4 连接反应  25-26
    1.5 转化和筛选阳性克隆  26
    1.6 阳性克隆的鉴定  26
  2 miR-155 靶点的验证  26-30
    2.1 miR-155 mimics 与报告载体共转染 293T 细胞  26
    2.2 报告基因的表达检测  26-30
实验结果  30-34
  1 TPM1 3’UTR 报告载体的构建  30-32
    1.1 TPM13’UTR 的扩增  30-31
    1.2 TPM13’UTR 与克隆载体 pUCm-T 的连接  31
    1.3 TPM13’UTR 与报告载体 pEGFP-N1 的连接  31-32
  2 mir-155 靶序列的验证  32-34
讨论  34-35
参考文献  35-38
附录  38-43
  1. 缩略词  38-40
  2. 主要溶液的配制  40-41
  3. DH5α 感受态制备  41-43
综述 miRNA in breast cancer tumorigenesis  43-57
  Reference  53-57
致谢  57-58
攻读硕士学位期间发表文章  58-59

miR-155对乳腺癌中抑癌基因TPM1的抑制作用研究

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