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在纤维蛋白凝块上诱导脐血间充质干细胞向膀胱尿路上皮细胞分化的研究

作　者: 广茜茜
导　师: 畅继武
学　校: 天津医科大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 纤维蛋白凝块 脐血间充质干细胞 尿路上皮细胞 分化 共培养
分类号: R363
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


目的：探讨脐血来源间充质干细胞在纤维蛋白凝块上分化为膀胱尿路上皮细胞的可能性。内容：实验组,将脐血间充质干细胞接种于人工制备的脐血来源的纤维蛋白凝块上与胎儿膀胱尿路上皮细胞共培养。对照组,脐血间充质干细胞接种于人工制备的脐血来源的纤维蛋白凝胶上仅用DMEM/F12培养基培养。倒置相差显微镜观察脐血间充质干细胞、胎儿膀胱尿路上皮细胞的形态,透射电子显微镜下观察鉴定尿路上皮,免疫组织化学染色观察细胞广谱角蛋白胞浆表达。方法：1.采用密度梯度离心从胎儿的脐带血中分离提取间充质干细胞,采用贴壁筛选培养法进行培养和纯化UCB-MSCS。2.取生长良好的第三代UCB-MSCs,通过流式细胞仪检测细胞表面抗原标记(CD44, CD90CD34, CD45)进行细胞检测。3.利用胶原酶消化法分离膀胱尿路上皮细胞,用透射电镜和免疫组织化学染色细胞广谱角蛋白鉴定细胞。4.采用加入氯化钙溶液的方法用脐血的血浆,制备纤维蛋白凝块。5.将-定密度的脐血间充质干细胞接种于纤维蛋白凝块表面,使其生长。6.应用共培养技术将接种有UCB-MSCs的纤维蛋白凝块与膀胱尿路上皮细胞共培养,通过体外微环境诱导UCB-MSCs,收集诱导14天后的纤维蛋白凝块上的UCB-MSCs进行透射电镜和免疫组织化学染色细胞广谱角蛋白鉴定细胞。结果：1.采用密度梯度离心从胎儿的脐带血中分离提取间充质干细胞,经过传代培养得到纯化,第三代细胞大部分呈长梭形,排列规则,呈水草样状。流式细胞仪检测细胞表面标志物CD44, CD90表达阳性,而造血干细胞和内皮细胞的标记CD34, CD45表达阴性,这表明细胞为间充质干细胞。2.利用胶原酶消化法分离得到的膀胱尿路上皮细胞,可以进行传代培养,通过免疫细胞化学染色细胞广谱角蛋白阳性和透射电镜两种方法来鉴定,结果表明细胞为膀胱尿路上皮细胞。3.应用共培养技术将接种有UCB-MSCs的纤维蛋白凝块与膀胱尿路上皮细胞共培养：纤维蛋白凝块上脐血间充质干细胞逐渐伸展呈多角形,细胞扁平变大,透射电子显微镜下具有膀胱尿路上皮细胞的超微结构,抗广谱角蛋白(AE1/AE3)免疫组织化学染色阳性。结论：1.体外成功从胎儿脐带血中分离培养得到纯度较高的MSCs,且该细胞具有干细胞的自我更新和多向分化潜能的特点。2.体外成功的从引产胎儿膀胱中分离、培养获得完全纯化的膀胱尿路上皮细胞,为共培养提供了细胞微环境。3.体外利用共培养的方法将纤维蛋白凝块上诱导脐血间充质干细胞分化为膀胱尿路上皮细胞,为膀胱组织工程提供了可以使用种子细胞和细胞支架。

全文目录


中文摘要  4-6
Abstract  6-10
缩略语  10-11
前言  11-13
  研究现状、成果  11-12
  研究目的、方法  12-13
一、脐血间充质干细胞的分离、纯化、培养、鉴定  13-25
  1.1 材料和方法  13-18
    1.1.1 材料  13-15
    1.1.2 实验方法  15-18
  1.2 结果  18-22
    1.2.1 脐血间充质干细胞的形态观察  18-20
    1.2.2 传代UCB-MSCs的形态学变化  20
    1.2.3 UCB-MSCs生长曲线  20-21
    1.2.4 UCB-MSCs分裂指数曲线  21-22
    1.2.5 UCB-MSCs流式鉴定结果  22
  1.3 讨论  22-24
  1.4 小结  24-25
二、人膀胱尿路上皮细胞的分离、纯化、培养、鉴定  25-34
  2.1 材料和方法  25-28
    2.1.1 材料  25-27
    2.1.2 实验方法  27-28
  2.2 结果  28-31
    2.2.1 原代膀胱尿路上皮细胞的形态观察  28-29
    2.2.2 传代膀胱尿路上皮细胞的形态观察  29
    2.2.3 膀胱尿路上皮细胞的鉴定  29-31
  2.3 讨论  31-32
  2.4 小结  32-34
三、纤维蛋白凝块的制备和脐血间充质干细胞与膀胱尿路上皮细胞共培养  34-43
  3.1 材料和方法  34-38
    3.1.1 材料  34-35
    3.1.2 实验方法  35-38
  3.2 结果  38-40
    3.2.1 膀胱尿路上皮细胞的形态观察  38
    3.2.2 UCB-MSCs的形态学观察  38
    3.2.3 共培养14d后UCB-MSCs免疫组织化学染色  38-39
    3.2.4 共培养14d后UCB-MSCs的超微结构特点  39-40
  3.3 讨论  40-42
  3.4 小结  42-43
结论  43-44
论文创新点  44-45
参考文献  45-50
发表论文和参加科研情况说明  50-51
综述  51-65
  间充质干细胞的定向培养与观察  51-60
  综述参考文献  60-65
致谢  65

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 病理学 > 病理生理学
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