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黄芪对大鼠脑出血灶周围凋亡细胞形态与凋亡相关蛋白及其基因作用的研究

作　者: 韩金利
导　师: 秦毅
学　校: 宁夏医科大学
专　业: 人体解剖与组织胚胎学
关键词: 黄芪甲苷 黄芪注射液 脑出血 凋亡
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


目的观察黄芪对大鼠脑出血灶周围凋亡细胞形态与凋亡相关蛋白及其基因的作用，探讨大鼠脑出血后细胞凋亡的规律及可能的凋亡通路，为黄芪应用于临床脑出血的治疗提供理论和实验依据。方法清洁级健康成年雄性SD大鼠共240只，体重300±50g。电镜、免疫组化、RT-PCR各用鼠80只，分为正常组、模型组、黄芪注射液组和黄芪甲苷组，每组再分为1d、2d、3d、7d小组，每小组各5只。应用脑立体定位仪于大鼠尾壳核注入肝素化VII型胶原酶建立脑出血模型。各药物组SD大鼠于脑出血模型制作后0h开始腹腔注射黄芪注射液(4g·kg-1·d-1)或黄芪甲苷(4mg·kg-1·d-1)进行干预，继之每隔24h注射一次。正常组和模型组大鼠腹腔注射相应量的生理盐水。分别通过神经行为学评分，电镜，免疫组织化学染色和RT-PCR方法观察各小组大鼠神经行为学情况，脑出血灶周围细胞超微结构变化情况，凋亡相关蛋白表达情况、凋亡相关基因表达情况，探讨大鼠脑出血后细胞凋亡的可能通路，为黄芪应用于临床脑出血的治疗提供实验依据。结果①大鼠神经行为学评分：黄芪注射液组和黄芪甲苷组均能明显降低脑出血大鼠的神经功能行为学评分的级别（P<0.05）；黄芪注射液和黄芪甲苷7d组大鼠神经行为学改善情况明显优于相应药物1d、2d、3d治疗组（P<0.05）；黄芪注射液3d、7d组与黄芪甲苷相应组相比，神经行为学评分明显减低（P<0.05）。②电镜：黄芪注射液和黄芪甲苷3d、7d组大鼠脑出血灶周围细胞超微结构损伤程度明显轻于模型3d、7d组；黄芪注射液和黄芪甲苷7d组出血灶周围细胞超微结构的恢复程度明显优于黄芪注射液和黄芪甲苷3d组；黄芪注射液7d组细胞超微结构的恢复程度要优于黄芪甲苷7d组。③大鼠脑组织免疫组化染色：Bcl-2、Bax及Caspase-3在正常脑组织中仅有少量表达，且Bcl-2/Bax的比值接近于1；与正常组相比，模型组、黄芪注射液组、黄芪甲苷组Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白的表达均明显增加（P<0.05）；与模型2d、3d、7d组相比，黄芪注射液和黄芪甲苷2d、3d、7d组Bcl-2蛋白的表达明显升高（P<0.05），Bax和Caspase-3蛋白的表达均明显降低（P<0.05）；与黄芪注射液和黄芪甲苷3d组相比，黄芪注射液和黄芪甲苷7d组Bcl-2蛋白的表达均明显升高（P<0.05），Bax和Caspase-3蛋白的表达均明显降低（P<0.05）；与黄芪甲苷3d组相比，黄芪注射液3d组Bcl-2蛋白的表达明显升高（P<0.05），Bax和Caspase-3蛋白的表达明显降低（P<0.05）；与黄芪甲苷7d组相比，黄芪注射液7d组Bcl-2蛋白的表达明显升高（P<0.05），Bax和Caspase-3蛋白的表达明显降低（P<0.05）。④RT-PCR：Bcl-2mRNA、Bax mRNA及Caspase-3mRNA在正常脑组织中仅有少量表达，且Bcl-2mRNA/Bax mRNA的比值等于1；与正常组相比，模型组、黄芪注射液组、黄芪甲苷组Bcl-2mRNA、Bax mRNA及Caspase-3mRNA表达均明显升高（P<0.05）；与模型2d、3d、7d组相比，黄芪注射液和黄芪甲苷2d、3d、7d组Bcl-2mRNA表达均明显升高（P<0.05），Bax mRNA和Caspase-3mRNA表达均明显降低（P<0.05）；与黄芪注射液和黄芪甲苷3d组相比，黄芪注射液和黄芪甲苷7d组Bcl-2mRNA表达明显升高（P<0.05），Bax mRNA和Caspase-3mRNA表达均明显降低（P<0.05）；与黄芪甲苷3d组相比，黄芪注射液3d组Bcl-2mRNA表达明显升高（P<0.05），Bax mRNA和Caspase-3mRNA均明显降低（P<0.05）；与黄芪甲苷7d组相比，黄芪注射液7d组Bcl-2mRNA明显升高（P<0.05），Bax mRNA和Caspase-3mRNA均明显降低（P<0.05）。结论①黄芪能不同程度的改善SD大鼠脑出血后的神经行为学损伤和出血灶周围细胞超微结构的凋亡改变。②黄芪可能通过增强Bcl-2mRNA的转录和减弱Bax mRNA、Caspase-3mRNA的转录，继之增强Bcl-2蛋白合成和减弱Bax、Caspase-3蛋白合成，从而抑制大鼠脑出血灶周围细胞凋亡。③随着用药时间的延长，黄芪对大鼠脑出血灶周围细胞凋亡的抑制作用更加明显，且黄芪注射液的抑制作用优于黄芪甲苷。

全文目录


摘要  4-7
ABSTRACT  7-13
前言  13-15
材料与方法  15-27
结果  27-33
讨论  33-38
结论  38-39
附图  39-52
参考文献  52-56
综述  56-67
  综述参考文献  62-67
致谢  67-69
攻读学位期间发表学术论文  69

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学 > 中药实验药理
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