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桂枝芍药知母汤对CIA模型大鼠Toll样受体信号转导通路的作用和机制研究

作　者: 胡雨峰
导　师: 马健
学　校: 南京中医药大学
专　业: 中医临床基础
关键词: 桂枝芍药知母汤历节类风湿关节炎 Toll样受体信号转导通路
分类号: R285.5
类　型: 博士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

研究背景：类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis RA)是一种以关节和关节周围组织的非感染性炎症为主的异质性、系统性、慢性自身免疫性疾病,以关节肿痛、强直、畸形和功能障碍为主要临床表现。具体症状表现为双手、腕和足关节的对称性多关节炎,亦可累及膝、髋等大关节。RA的病因至今未明,目前仍属一种难治性疾病,尚无特异有效根治本病的疗法和药物,误诊率高、不合理用药率较高、致残率高,而中医药治疗因为其副作用较小、并且在缓解疼痛、提高患者生存质量方面有着较好的效果而具有一定的优势。研究基础：滑膜炎是RA的基本病理表现,TLR是存在于细胞上介导炎性介质产生的重要受体,其主导的细胞信号转导通路在宿主防御反应中起到了关键的作用,特别是在作为连接天然免疫和获得性免疫的桥梁时显然异常重要。然而TLR的过度表达及活化将导致严重的机体免疫功能紊乱。目前人们做了大量的研究证明了TLR异常活化所介导的炎症反应与RA的发病及进展,尤其是滑膜炎症的发生发展和进展有着密不可分的联系。研究目标：RA隶属中医学“痹症”之中“历节病”的范畴。仲景祖师早在千年前就认识到了其存在。其对历节病病因病机的认识、辨证施治的方法和所创立的针对性方剂桂枝芍药知母汤至今仍在指导着临床实践。本研究通过文献寻找桂枝芍药知母汤治疗RA的理论基础,并建立Ⅱ型胶原诱导动物RA模型,通过体内外实验观察桂枝芍药知母汤对Toll样受体细胞信号转导通路相关指标作用的研究分析,探索其治疗RA的作用机理。为桂枝芍药知母汤治疗RA提供更深层次的客观依据。研究方法：理论研究：通过回顾桂枝芍药知母汤的组方意义、临床应用以及历代医家对RA病名、病因、病机的认识、相关临床实践及实验研究,探讨RA以《金匮要略》理论基础为指导,从历节病论治,并使用桂枝芍药知母汤治疗可能性和可靠性。实验部分以CIA大鼠为受试对象,观察桂枝芍药知母汤煎剂对CIA模型鼠关节评分、关节体积、关节肿胀度及关节病理组织学的影响,使用SP免疫组化法、酶联免疫吸附法、蛋白质印迹法和PCR法对实验大鼠滑膜组织中的相关指标：炎性细胞因子IL-1、IL-6、IL-17及TNF-α,核转录因子NF-κB,接头蛋白MyD88,Toll样受体2、4、9以及TLR逆调控因子SIGIRR进行了检测,从细胞、蛋白及基因三个层面揭示桂枝芍药知母汤对RA治疗的作用机理。研究结果：从病因病机、症状及治法分析得出RA可以从历节病论治,实验显示桂枝芍药知母汤水煎剂对CIA大鼠关节肿胀有一定的抑制作用,能减轻关节滑膜的增生程度及关节软骨的损伤程度。桂枝芍药知母汤各剂量组分别不同程度的表现出了对CIA大鼠滑膜组织中TLR2、TLR4、TLR9、MyD88、NF-κB、IL-1、IL-6、IL-17、TNF-α表达的抑制作用, CIA大鼠模型组滑膜组织中SIGIRR的表达较空白对照组有所降低,而桂枝芍药知母汤高、低剂量组SIGIRR的表达却明显高于模型组。研究结论：①RA可以从“历节”病论治。②桂枝芍药知母汤可以明显减轻CIA模型大鼠足肿胀度、降低关节评分并减轻关节病理组织改变。③TLR信号转导通路介导的炎症反应和RA的发病相关。④桂枝芍药知母汤对TLR信号通路的转导有抑制作用,并可能藉此减轻RA炎症反应,起到缓解病情的作用。⑤TLR信号通路负调控因子的被抑制可能导致在RA滑膜炎的发生或进展。⑥桂枝芍药知母汤可能可以通过激活TLR信号通路负调控因子SIGIRR的表达来起到抑制TLR信号通路所介导的RA滑膜炎症反应的作用。研究创新：使用多种技术手段(SP免疫组化、酶联免疫吸附、蛋白质印迹及PCR法)对实验大鼠滑膜组织中的多个指标进行了检测,从细胞、蛋白及基因三个层面揭示桂枝芍药知母汤治疗RA的作用机理。被检测指标涵盖了Toll样受体信号转导通路的多个重要位点,且重要指标采用不同技术路线进行了重复检验,具有较强的客观性。

全文目录

摘要  7-9
Abstract  9-11
前言  11-12
第一部分文献研究  12-41
  1 桂枝芍药知母汤理论研究  12-21
    1.1 桂枝芍药知母汤组方意义  12
    1.2 桂枝芍药知母汤组方特色  12-13
    1.3 桂枝芍药知母汤的临床应用  13-21
  2 《金匮要略》对历节的认识及辨证论治  21-23
    2.1 《金匮要略》开创了对历节辨治的先河  21
    2.2 《金匮要略》对于历节病因病机的认识  21-22
    2.3 后世医家对于历节病病因病机的认识  22-23
    2.4 《金匮要略》对于历节病的证治  23
  3 中医学对于类风湿关节炎(RA)的认识及研究  23-30
    3.1 中医学对于RA相关病名的认识  23-24
    3.2 古代医家对于RA病因病机的认识  24
    3.3 当代医家对于RA病因病机的研究  24-25
    3.4 现代中医学对于RA的临床研究  25-29
    3.5 现代中医学对于RA的实验研究进展  29-30
  4. 现代医学对RA的研究进展  30-34
    4.1 关于RA病因及发病机制的研究  30-31
    4.2 Toll样受体信号转导通路研究进展  31-33
    4.3 现代医学对RA的治疗  33-34
  5 小结  34-35
  参考文献  35-41
第二部分实验研究  41-82
  实验一桂枝芍药知母汤煎剂对CIA模型大鼠关节炎症的影响  41-49
    1 实验材料  41
    2 实验方法  41-42
    3 实验结果  42-48
    4 讨论  48-49
  实验二酶联免疫吸附法检测桂枝芍药知母汤煎剂对CIA模型大鼠滑膜IL-1,IL-6,IL-17,TNF-α及NF-κB表达的影响  49-58
    1 实验材料  49
    2 实验方法  49-50
    3 实验结果  50-54
    4 讨论  54-58
  实验三桂枝芍药知母汤煎剂对CIA模型大鼠关节滑膜组织TLR2,TLR4平均光密度值表达的影响  58-64
    1 实验材料  58
    2 实验方法  58-59
    3 实验结果  59-62
    4 讨论  62-64
  实验四桂枝芍药知母汤煎剂对CIA模型大鼠关节滑膜TLR2,TLR4,TLR9,MyD88及SIGIRR蛋白表达的影响  64-73
    1 实验材料  64-65
    2 实验方法  65-67
    3 实验结果  67-71
    4 讨论  71-73
  实验五桂枝芍药知母汤煎剂对CIA模型大鼠关节滑膜TLR2,TLR4及TLR9 mRNA表达的影响  73-79
    1. 实验材料  73-74
    2 实验方法  74-76
    3 实验结果  76-77
    4. 讨论  77-79
  参考文献  79-82
第三部分有关问题讨论  82-90
  1 桂枝芍药知母汤方中芍药的考辨  82-84
  2 类风湿性关节炎动物模型的选择及评价  84-86
  3 桂枝芍药知母汤对Toll样受体信号转导通路的作用机制  86-88
  参考文献  88-90
结语  90-92
  1 研究结论与依据  90-91
  2 研究创新  91
  3 存在问题和展望  91-92
附录  92-94
攻读博士学位期间发表的学术论文目录  94-95
致谢  95-96
个人简介  96

桂枝芍药知母汤对CIA模型大鼠Toll样受体信号转导通路的作用和机制研究

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