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植物性功能食品原料的内分泌干扰效应及其机制

作　者: 陆玲
导　师: 汪之顼; 李忠
学　校: 南京医科大学
专　业: 儿少卫生与妇幼保健学
关键词: 植物性功能食品雌激素受体雄激素受体内分泌干扰效应ERK1/2 雌激素依赖性乳腺癌细胞MCF-7 雄激素依赖性前列腺癌细胞22RV1
分类号: R173
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

随着社会的发展和人们保健意识的提高，一些传统的食用食物和中草药被广泛的应用于植物性功能食品中，例如凉茶，其主要原料就有甘草、布渣叶、金银花、菊花、仙草、鸡蛋花、夏枯草等。这些植物性功能食品的发展极大地扩大了人群对各种植物化学物质的暴露范围。植物中含有丰富的化学物质，包括植物性来源的雌激素和雄激素，这些是植物体内天然的激素物质，具有一定的内分泌干涉效应。部分植物性功能食品利用植物激素的内分泌干预作用，获得相应的疾病预防作用，如大豆异黄酮预防肿瘤、骨质疏松和心血管疾病。但是对于特定的人群，例如正在生长发育的儿童、更年期妇女、乳腺癌或者前列腺癌人群来说，摄入了这些植物类激素就有可能产生潜在的风险。目前，甘草和当归就被报道具有雌激素效应，能够促进乳腺癌细胞的增长，而对其他大部分植物性功能食品（饮料）的原料的内分泌干扰效应尚缺乏了解，尤其是雄激素效应方面。所以，为了更安全的食用这些植物性功能食品，就有必要对它们是否具有内分泌干扰效应及其机制进行研究。目的：本研究采用雌激素依赖性乳腺癌细胞（MCF-7）和雄激素依赖性前列腺癌细胞(22RV1)为模型，研究植物性功能食品的原料是否具有内分泌干扰效应并探讨其机制。方法：采用MTS实验检测植物性功能食品原料提取物对细胞活性的影响；采用RT-PCR检测提取物对雌激素受体（ER）和雄激素受体(AR)靶基因的影响；通过Western blot检测提取物对ERα、ERK/1/2蛋白表达的影响和ERα及ERK1/2蛋白的分别在浆核的表达情况；应用免疫荧光方法检测ERα及ERK1/2的浆核定位；采用免疫沉淀实验检测ERα和ERK1/2蛋白是否相互结合。结果：对八种植物提取物（当归、布渣叶、甘草、金银花、菊花、仙草、鸡蛋花、夏枯草）进行筛检，在雌激素依赖性乳腺癌细胞MCF-7中，MTS实验结果显示，与对照相比布渣叶、当归提取物在一定浓度下能够增加MCF-7细胞的活性，且这种活性能够被ERα的拮抗剂ICI182，780（ICI）和MEK1/2抑制剂U0126所抑制，这些结果表明ERα和ERK1/2信号通路参与了提取物介导的细胞活性的增加；Western blot显示当归和布渣叶在MCF-7细胞中能够下调ERα蛋白的水平，且能够介导ER的靶基因pS2表达的增加，加入ICI或者U0126之后，提取物介导的pS2水平明显下降；当归和布渣叶能诱导延迟的ERK1/2激活，并呈现时间效应，当加了U0126后，这种诱导作用被阻断，而ICI对提取物介导的ERK1/2的激活没有影响，表明ERK1/2激活位于ERα介导的信号通路的上游；当归和布渣叶能够促进ERα的核转位，诱导磷酸化的ERK1/2和ERα蛋白的结合。在雄激素依赖型前列腺癌细胞22RV1中，对布渣叶、甘草和当归三种植物提取物进行筛检，布渣叶提取物与对照相比，能够促进22RV1细胞的活性，并且能够诱导雄激素受体靶基因PSA的表达，当加入雄激素受体抑制剂后，细胞活性和雄激素受体靶基因水平均明显下降，当归和甘草提取物与对照相比并没有明显改变；当加入ERK1/2的抑制剂U0126后，同样抑制了布渣叶提取物介导的细胞活性和PSA的表达。结论：当归、布渣叶具有雌激素效应，布渣叶同时还具有雄激素效应；这些提取物介导的内分泌效应的发生是通过ERα或AR介导；且延迟的ERK1/2的激活是当归、甘草和布渣叶介导的雌激素效应所需要的。

全文目录

摘要  6-9
ABSTRACT  9-12
前言  12-15
材料与方法  15-29
  1 材料  15-17
    1.1 细胞株  15
    1.2 试剂与试剂盒  15-16
    1.3 抗体  16
    1.4 主要仪器  16-17
  2 方法  17-29
    2.1 植物提取物制备  17
    2.2 细胞培养  17-18
    2.3 MTS 实验  18-19
    2.4 Real time PCR 反应  19-21
    2.5 细胞浆-核蛋白的制备  21-22
    2.6 Western blot 分析  22-26
    2.7 免疫荧光  26-27
    2.8 免疫沉淀  27-28
    2.9 统计分析  28-29
结果  29-43
  1、植物提取物的雌激素效应  29-39
  2、植物提取物的雄激素效应  39-43
讨论  43-48
参考文献  48-55
文献综述  55-69
  参考文献  62-69
附录  69-71
主要缩略词中英文对照  71-72
致谢  72-73

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