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海洋放线菌Y12-26代谢物中活性组分的探究

作　者: 杨芳
导　师: 陶黎明; 肖明
学　校: 上海师范大学
专　业: 微生物学
关键词: 海洋放线菌发酵优化活性跟踪薄层层析高效液相色谱法
分类号: S917.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

海洋放线菌Y12-26是国家海洋局第一海洋研究所对一批海洋微生物进行农用活性筛选，所得到的一株代谢产物对植物病原真菌具有抑制活性的放线菌，经过菌株鉴定该菌属于黄三素链霉菌。本文以对稻瘟病菌的生物活性为跟踪，经过有机溶剂萃取、硅胶柱层析、薄层层析、高效液相色谱分析等分离手段，对海洋放线菌Y12-26的发酵代谢产物中的杀菌活性组分进行探究。在对该菌株代谢物进行分离过程中，对其发酵条件进行初步优化以及活性组分早期鉴定。本文从发酵产物的酸碱稳定性，热稳定性，极性等方面进行初步优化，目的是分离出尽可能多的有效成分。该菌株产生的有效成分是一种强极性物质，含量极低，原始发酵液抑菌活性很小，因此要使用多级纯化方法除去杂质。本实验研究重点之一是寻找合适的展开剂。由于本实验提取的是新的物质，所以没有相关的文献资料可查阅，需要不断变换展开剂的组成来达到最佳效果。实验中，为了实现有效成分与其他杂质有效分离，尝试了很多溶剂组合，最终确定甲醇：二氯甲烷=3:20的混合液作为本实验的展开剂。

全文目录

中文摘要  5-6
Abstract  6-10
第一章综述  10-33
  1.1 引言  10
  1.2 生物农药的种类  10-12
    1.2.1 植物源农药  11
    1.2.2 动物源农药  11
    1.2.3 微生物源农药  11-12
  1.3 海洋微生物农药  12-13
  1.4 农药抗生素  13-16
    1.4.1 国外农用抗生素研究概况  13-15
    1.4.2 国内农用抗生素研究概况  15-16
  1.5 海洋真菌产生的活性物质  16-20
  1.6 海洋细菌产生的活性物质  20-23
    1.6.1 内酯类化合物  21-22
    1.6.2 环肽类和多肽类  22-23
    1.6.3 多烯类  23
    1.6.4 其它类化合物  23
  1.7 海洋放线菌产生的活性物质  23-33
    1.7.1 生物碱类  24-25
    1.7.2 大环内酯类  25-28
    1.7.3 醌类  28-29
    1.7.4 酰胺类  29
    1.7.5 吡喃酮类化合物  29-30
    1.7.6 其他类化合物  30-33
第二章海洋放线菌 Y12-26 研究背景  33-38
  2.1 立题背景  33-34
  2.2 研究意义  34
  2.3 海洋放线菌 Y12-26 简介  34-38
    2.3.1 Y12-26 形态特征  34-35
    2.3.2 菌株 Y12-26 系统发育树  35
    2.3.3 Y12-26 的 16S rDNA 序列  35-36
    2.3.4 Y12-26 的培养特征  36-37
    2.3.5 Y12-26 的生理生化特征  37-38
第三章实验流程  38-40
第四章海洋放线菌 Y12-26 的发酵条件的优化及活性组分的早期鉴定  40-49
  4.1 材料和方法  40-44
    4.1.1 实验仪器  40-41
    4.1.2 实验试剂  41
    4.1.3 实验菌种  41
    4.1.4 海洋放线菌 Y12-26 的代谢产物活性测定  41-42
    4.1.5 海洋放线菌 Y12-26 的初步发酵优化  42-43
    4.1.6 海洋放线菌 Y12-26 发酵温度的研究  43
    4.1.7 海洋放线菌 Y12-26 活性代谢产物萃取溶剂选择和极性的研究  43
    4.1.8 海洋放线菌 Y12-26 活性产物的热稳定性研究  43-44
    4.1.9 海洋放线菌 Y12-26 活性产物的酸碱稳定性研究  44
  4.2 结果与分析  44-48
    4.2.1 不同发酵时间对 Y12-26 代谢产物活性的影响  44
    4.2.2 不同盐浓度对 Y12-26 代谢产物活性的影响  44-45
    4.2.3 不同发酵温度对 Y12-26 代谢产物活性的影响  45
    4.2.4 海洋放线菌 Y12-26 活性产物的极性  45-46
    4.2.5 海洋放线菌 Y12-26 活性产物的热稳定性  46-47
    4.2.6 海洋放线菌 Y12-26 活性产物的酸碱稳定性  47-48
  4.3 小结  48-49
第五章海洋放线菌 Y12-26 抑菌活性组分的分离纯化  49-58
  5.1 研究材料  49-50
    5.1.1 实验仪器  49-50
    5.1.2 实验试剂  50
  5.2 研究方法  50-55
    5.2.1 菌株 12-26 活性组分粗品的制备  50
    5.2.2 海洋放线菌 Y12-26 的发酵液预处理  50-51
    5.2.3 TLC 条件优化  51-52
    5.2.4 硅胶柱层析  52-53
    5.2.5 HPLC 条件优化  53
    5.2.6 Y12-26-X 抑菌效果的测试  53-54
    5.2.7 Y12-26-X 的活体活性的测定  54-55
  5.3 结果与分析  55-58
    5.3.1 TLC 条件优化  55
    5.3.2 硅胶柱层析  55-56
    5.3.3 HPLC 条件优化  56-57
    5.3.4 Y12-26-X 抑菌效果的测试  57
    5.3.5 Y12-26-X 的活体活性的测定  57-58
第六章结论与展望  58-59
  6.1 主要结论  58
  6.2 展望  58-59
参考文献  59-67
致谢  67

海洋放线菌Y12-26代谢物中活性组分的探究

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