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共轭亚油酸诱导小鼠附睾脂肪减少发生机制的研究

作　者: 蔡德敏
导　师: 王艳玲; 杨国庆
学　校: 河南农业大学
专　业: 基础兽医学
关键词: 共轭亚油酸（CLA） 脂肪营养不良 脂肪细胞的脂解 围脂滴蛋白（perilipin1） 脂肪的合成 脂肪细胞的分化 细胞凋亡
分类号: S858.91
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


为了了解共轭亚油酸（CLA）诱导的动物脂肪减少的发生机制，本研究在两组（n=12）6周龄雄性昆明小鼠的日粮中分别添加1.5%的CLA（试验组）或亚油酸（LA，对照组），13天后麻醉处死采样，对附睾脂肪组织的分解、合成以及附睾脂肪细胞的分化与凋亡进行了研究。结果显示，与对照组相比，日粮中含有CLA的小鼠的采食量与体重无显著差异(P>0.05)，但附睾脂肪组织含量及附睾脂肪组织中瘦素表达水平显著下降(P<0.01)，小鼠出现胰岛素抵抗、高血脂以及脂肪细胞形态发生异常，以上结果表明CLA已成功诱导出脂肪营养不良的小鼠模型。荧光定量PCR和Western blotting检测发现，附睾脂肪组织中perilipin1的mRNA和蛋白质表达水平都显著下降。perilipin1的正调节因子过氧化物酶体增殖体激活受体γ(PPARγ)的mRNA表达水平显著下降(P<0.01)，而perilipin1的负调节因子肿瘤坏死因子α（TNFα）的mRNA水平显著升高(P<0.01)；荧光素酶报告基因系统检测发现，在3T3L1细胞的培养液中添加CLA能抑制perilipin1的启动子活性。为进一步研究perilipin1减少引起的功能变化，经小鼠附睾脂肪的体外培养试验发现，CLA能够增加脂肪组织的基础脂解率(P<0.01)，但显著减弱脂肪组织在激素刺激下产生的脂解反应。因此CLA能够造成脂肪营养不良小鼠的脂肪组织中Perilipin1表达的下降并导致附睾脂肪组织的异常脂解，成为脂肪组织减少的原因之一。在脂肪合成的研究中，用荧光定量PCR分析脂肪合成的关键酶ACC、SCD、FAS以及它们的主要激活因子SREBP-1c的表达，结果发现ACC、SCD、SREBP1-C的表达下降(P<0.01)，表明脂肪的从头合成受到抑制，荧光定量PCR对LPL的mRNA表达水平检测发现其mRNA表达也显著下降(P<0.01)，表明血液中供应脂肪合成的原料短缺，造成脂肪合成减少。根据试验数据，试验组小鼠脂肪组织中的PPARγ的mRNA表达显著下降(P<0.01)，脂肪细胞形态学异常，表明CLA还能够抑制脂肪细胞的正常分化。最后通过检测了小鼠附睾脂肪细胞胞浆中Caspase3/7的活性来鉴定脂肪细胞的凋亡情况，结果表明CLA能够促进脂肪细胞的凋亡。结论：共轭亚油酸通过影响脂肪细胞的脂解、脂肪的合成、脂肪细胞的分化与凋亡这四种生物学活性，导致小鼠的脂肪减少。

全文目录


致谢  4-7
摘要  7-8
1 文献综述  8-20
  1.1 共轭亚油酸的生理学功能以及对健康的重要意义  8-11
    1.1.1 CLA 结构与来源  8-10
    1.1.2 CLA 对机体脂肪含量的影响  10-11
  1.2 脂肪营养不良的类型与特点  11-13
    1.2.1 全身性脂肪营养不良  12
    1.2.2 部分性脂肪营养不良  12-13
  1.3 脂肪组织含量的主要影响因素  13-20
    1.3.1 围脂滴蛋白在脂肪分解中的重要作用  13-17
    1.3.2 脂肪合成的关键酶与调节因子  17-18
    1.3.3 PPARγ在脂肪细胞分化中的作用  18-19
    1.3.4 Caspase3/7 在脂肪细胞凋亡中的作用  19-20
2 引言  20-21
3 材料与方法  21-32
  3.1 材料  21-22
    3.1.1 试验动物  21
    3.1.2 仪器  21-22
    3.1.3 试剂与抗体  22
  3.2 试验方法  22-31
    3.2.1 试验饲料的配制  22
    3.2.2 试验小鼠采食量、体重以及胰岛素耐受  22-23
    3.2.3 CLA 小鼠血脂以及附睾脂肪含量的检测  23
    3.2.4 脂肪细胞的组织形态学检测  23-24
    3.2.5 Quantitative RT-PCR 对脂肪组织合成与代谢相关基因表达的检测  24-25
    3.2.6 脂肪组织脂解水平的检测  25-26
    3.2.7 Western Blotting 对 Perilipin1 蛋白表达的检测  26-27
    3.2.8 脂肪细胞凋亡的检测  27-28
    3.2.9 荧光素酶报告基因系统对 perilipin1 启动子活性的检测  28-31
  3.3 数据处理  31-32
4 结果与分析  32-43
  4.1 CLA 对小鼠采食量和体重的影响  32
  4.2 CLA 对小鼠胰岛素耐受与血脂的影响  32
  4.3 CLA 小鼠脂肪含量的影响  32
  4.4 CLA 对小鼠脂肪细胞形态的影响  32-37
  4.5 CLA 对脂肪细胞的脂解的影响  37
  4.6 CLA 对 perilipin 1 表达的影响  37
  4.7 CLA 对 perilipin1 启动子活性的影响  37
  4.8 CLA 对脂肪合成相关指标的影响  37
  4.9 CLA 对脂肪细胞分化与凋亡的影响  37-43
5 结论  43-44
6 讨论  44-47
参考文献  47-57
英文摘要  57-59
发表论文及论著情况：  59

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 各种家畜、家禽、野生动物的疾 > 野生动物疾病 > 实验用动物
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