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西瓜细菌性果斑病菌突变文库的构建及纤维素酶活性突变体的筛选

作　者: 赵其龙
导　师: 胡方平; 蔡学清
学　校: 福建农林大学
专　业: 植物病理
关键词: 西瓜细菌性果斑病菌突变体致病性纤维素酶活性防治
分类号: S436.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

本实验将转座子Tn5转入到西瓜细菌性果斑病菌A13中，并获得了4136株克隆子，通过对克隆子的运动性、胞外蛋白活性和纤维素酶活性进行筛选，成功得到了一株纤维素酶活性丧失的菌株13-30。对突变菌株13-30的生长特性、运动性、致病性和稳定性等生物学特性的测定发现，该菌株不但有良好的稳定性，而且其生长特性、游动性和菌落形态与野生菌株A13相同，但突变菌株13-30丧失了对西瓜幼苗的致病能力。利用纤维素酶活性丧失的突变菌株13-30对西瓜细菌性果斑病进行了防治研究，结果表明在预接种突变菌株13-30后3h再接种野生菌株，接种后5天有一定的防病效果，随后病情加剧；而先接种突变菌株后6h接种野生菌株的处理，在7天后的防治效果为43.1%，处理后20天的防治效果降到32.5%；接种突变菌株13-30后12、18、24和36h再接种野生菌A13，处理后7天，其防病效果分别为76.1%、80.2%、75.2%和78.8%，20d后其防治效果仍有65.3%-67.8%。

全文目录

摘要  8-9
Abstract  9-10
1. 前言  10-17
  1.1 西瓜细菌性果斑病研究进展  10-14
    1.1.1 国内外研究历史  10-11
    1.1.2 病害症状特点  11
    1.1.3 病原菌的传播途径  11-12
    1.1.4 西瓜果斑病的防治  12-13
    1.1.5 西瓜果斑病致病机理的研究  13-14
    1.1.6 西瓜细菌性果斑病菌的全基因组测序  14
  1.2 转座子 Tn5 的研究  14-16
    1.2.1 Tn5 的结构  14
    1.2.2 Tn5 转座的机制  14-15
    1.2.3 Tn5转座位点的确认  15
    1.2.4 Tn5在西瓜果斑病菌中的研究现状  15-16
  1.3 本研究的意义  16-17
2. 西瓜品种感病性测定  17-21
  2.1 材料与方法  17-18
    2.1.1 实验材料  17
      2.1.1.1 供试西瓜品种和西瓜果实  17
      2.1.1.2 供试病原菌  17
      2.1.1.3 培养基  17
    2.1.2 实验方法  17-18
      2.1.2.1 西瓜苗的培养  17-18
      2.1.2.2 病原菌的培养  18
      2.1.2.3 接种方法  18
  2.2 结果与分析  18-19
  2.3 小结与讨论  19-21
3. 突变体文库的构建  21-28
  3.1 材料与方法  21-24
    3.1.1 材料  21
      3.1.1.1 供试病原菌菌株  21
      3.1.1.2 供试质粒  21
      3.1.1.3 培养基  21
      3.1.1.4 试剂与溶液  21
      3.1.1.5 抗生素  21
    3.1.2 实验方法  21-24
      3.1.2.1 质粒提取  21-22
      3.1.2.2 制备感受态细胞（CaCl2 法）  22-23
      3.1.2.3 转化  23
      3.1.2.4 克隆子的挑取与保存  23-24
  3.2 克隆子的菌落 PCR 鉴定  24-25
    3.2.1 PCR 模板的获得：  24
    3.2.2 果斑病菌的特异性检测  24-25
    3.2.3 gfp 基因的 PCR 扩增  25
  3.3 结果与分析  25-27
    3.3.1 突变文库的构建  25-27
  3.4 小结与讨论  27-28
4. 突变菌株的筛选  28-33
  4.1 材料与方法  28-30
    4.1.1 材料  28-29
      4.1.1.1 供试菌株  28
      4.1.1.2 供试植物及其品种  28
      4.1.1.3 培养基  28
      4.1.1.4 抗生素  28-29
    4.1.2 实验方法  29-30
      4.1.2.1 纤维素酶活性筛选  29
      4.1.2.2 致病性筛选  29
      4.1.2.3 运动性筛选  29-30
      4.1.2.4 胞外蛋白酶活性筛选  30
  4.2 结果与分析  30-31
  4.3 小结与讨论  31-33
5. 突变菌株 13-30 的生物学特性测定  33-40
  5.1 材料与方法  33-35
    5.1.1 供试菌株  33
    5.1.2 供试品种  33
      5.1.2.1 培养基  33
    5.1.3 实验方法  33-35
      5.1.3.1 菌落形态观察  33
      5.1.3.2 遗传稳定性测定  33-34
      5.1.3.3 运动性测定  34
      5.1.3.4 生长曲线的测定  34
      5.1.3.5 致病性测定  34-35
  5.2 结果与分析  35-39
    5.2.1 菌落形态观察结果  35
    5.2.2 遗传稳定性测定结果  35-36
    5.2.3 突变菌株运动性测定结果  36-37
    5.2.4 生长曲线测定结果  37-38
    5.2.5 致病性测定结果  38-39
  5.3 小结与讨论  39-40
6. 突变菌株 13-30 对西瓜细菌性果斑病的防治试验  40-46
  6.1 材料和方法  40-41
    6.1.1 材料  40
      6.1.1.1 供试菌株及培养  40
      6.1.1.2 供试植物及培养  40
    6.1.2 实验方法  40-41
      6.1.2.1 接种方法的确立  40-41
      6.1.2.2 西瓜幼苗接种菌株 13-30 后接种病原菌的防治试验  41
  6.2 结果与分析  41-44
    6.2.1 不同接种方法的发病结果  41-42
    6.2.2 突变菌株 13-30 对西瓜果斑病的防治效果  42-44
  6.3 小结与讨论  44-46
总结  46-47
参考文献  47-53
致谢  53

西瓜细菌性果斑病菌突变文库的构建及纤维素酶活性突变体的筛选

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