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羽藻细胞壁蛋白的研究

作　者: 黎近兴
导　师: 张波
学　校: 天津科技大学
专　业: 海洋生物学
关键词: 藓羽藻 细胞壁蛋白 分离纯化 新蛋白
分类号: Q946
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


对藓羽藻进行显微镜观察,藓羽藻生长素集中分布在叶尖,叶尖生长迅速使得大量原生质体高度集中。藓羽藻由于原生质体分布均匀,在距离不远的部位分布着细胞核。羽藻为单细胞多核管状绿藻,藻体主干和分枝均为一个细胞的组成部分,然而藻体和分枝并不是完全相通的。藻体主干与分枝之间没有细胞壁分隔,被认为是单一细胞。性成熟的藓羽藻产生大量孢子体,孢子体放散单孢子,单孢子具有轮生鞭毛能游动经过穿过藻体细胞壁游到海水中。单孢子放散完毕后藓羽藻藻体只剩下细胞壁的空壳。单孢子于第二年夏天发育成叶状体,完成世代交替。藓羽藻在原生质体被挤到海水能在3分钟之内迅速团聚成球状个体。在凝集素作用下分散的团聚体开始团聚成团。团聚成团后逐渐形成球状个体,球状体继续把周围细小的原生质体吸引过来成为更大的团聚体。整个团聚过程没任何外加物质,原生质体团聚能产生新的生命。对不同团聚时间的团聚体进行蛋白质抽提和检测,发现一个蛋白在团聚过程中不断增加,推断其为细胞膜或者细胞壁蛋白。分离了藓羽藻细胞壁,在CaCl2软化细胞壁后,用3M LiCl抽提细胞壁蛋白。通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测发现细胞壁中一共含10种主要可溶性蛋白。 Western blot检测结果显示细胞壁蛋白未受细胞质蛋白污染。利用凝胶过滤层析和离子交换层析分离纯化出两个单一细胞壁蛋白,分子量为33.5KD的CWPR1和分子量为68.0KD的CWPR2。对CWPR1进行N-端测序发现CWPR1是N-端封闭蛋白；对CWPR2进行二级质谱分析,通过NCBI和Swissprot数据库检索发现CWPR2是一个新的蛋白。

全文目录


摘要  5-6
ABSTRACT  6-10
1 文献综述  10-24
  1.1 绿藻  10
  1.2 藓羽藻  10-11
  1.3 藓羽藻的繁殖方式  11-12
    1.3.1 无性繁殖  11
    1.3.2 有性繁殖  11
    1.3.3 其他繁殖方式  11-12
  1.4 藓羽藻的生活史  12-13
  1.5 藓羽藻的愈伤机制  13-15
  1.6 藓羽藻原生质体团聚的研究  15-16
  1.7 藓羽藻细胞壁蛋白  16-24
    1.7.1 细胞壁  16-17
    1.7.2 细胞壁蛋白  17-19
    1.7.3 细胞壁蛋白分离与鉴定  19-24
2 藓羽藻的显微镜观察及团聚研究  24-34
  2.1 实验材料  24
  2.2 藓羽藻显微镜观察  24-25
    2.2.1 实验方法  24
    2.2.2 实验结果与讨论  24-25
  2.3 藓羽藻原生质体团聚的显微镜观察  25-26
    2.3.1 实验方法  25
    2.3.2 实验结果与讨论  25-26
  2.4 不同团聚时间的原生质体总蛋白  26-30
    2.4.1 总蛋白提取  26
    2.4.2 SDS-PAGE检测总蛋白  26-29
    2.4.3 实验结果与讨论  29-30
  2.5 团聚体不同组分的蛋白区别  30-34
    2.5.1 实验方法  30-31
    2.5.2 实验结果与讨论  31-34
3 藓羽藻细胞壁蛋白的研究  34-50
  3.1 仪器与试剂  34-35
    3.1.1 仪器  34
    3.1.2 试剂  34-35
  3.2 分离细胞壁  35-36
    3.2.1 溶液配制  35
    3.2.2 细胞壁分离  35
    3.2.3 注意事项  35-36
  3.3 提取细胞壁蛋白  36
    3.3.1 溶液配制  36
    3.3.2 提取蛋白质  36
  3.4 分光光度计检测细胞壁蛋白  36-38
    3.4.1 溶液配制  36
    3.4.2 提取蛋白质  36-37
    3.4.3 实验结果与讨论  37-38
  3.5 SDS-PAGE检测细胞壁蛋白  38-39
    3.5.1 实验方法  38
    3.5.2 实验结果与讨论  38-39
  3.6 Western blot检测  39-42
    3.6.1 溶液配制  39-40
    3.6.2 转膜  40
    3.6.3 膜的显色  40
    3.6.4 封闭及杂交  40-41
    3.6.5 实验结果与讨论  41-42
  3.7 细胞壁蛋白的纯化  42-46
    3.7.1 溶液配制  42-43
    3.7.2 纯化步骤  43
    3.7.3 实验结果与讨论  43-46
  3.8 蛋白质N-端测序  46
    3.8.1 溶液配制  46
    3.8.2 膜的处理步骤  46
    3.8.3 结果与讨论  46
  3.9 二级质谱分析  46-47
    3.9.1 样品准备  47
    3.9.2 实验结果与讨论  47
  3.10 串联质谱仪测定多肽序列  47-50
    3.10.1 样品准备  47-48
    3.10.2 实验结果与讨论  48-50
4 展望  50-52
5 参考文献  52-58
6 攻读硕士期间论文发表情况  58-60
7 致谢  60

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中图分类: > 生物科学 > 植物学 > 植物生物化学
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