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诱导胰腺和心肌病变的柯萨奇病毒B3 MKP株全基因组核苷酸序列分析

作　者: 李哲
导　师: 李凡
学　校: 吉林大学
专　业: 病原生物学
关键词: 柯萨奇病毒B3 核苷酸序列分析 种系进化分析 胰腺炎 心肌炎
分类号: R373.23
类　型: 博士论文
年　份: 2007年
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内容摘要


柯萨奇病毒(Coxsackievirus)是人类多种疾病的病原体。近年来,由于柯萨奇病毒感染报告不断增加,对人类健康造成一定的威胁,所以柯萨奇病毒基因特性的研究倍受学者们关注。为进一步认识不同来源病毒株与病毒遗传特性的关系,了解CVB3基因组特点及该病毒与心肌炎和胰腺炎的关系。本课题组对来自中国上海防疫站的柯萨奇病毒B组3型MKP株(CVB3/MKP)进行了研究。本实验采用RT-PCR技术获得覆盖CVB3/MKP全基因组的7个cDNA片段,经测序、拼接后得到全基因组序列。对CVB3/MKP 5′端非编码区、全长核苷酸序列及氨基酸序列与GenBank中其它CVB3进行比对分析,并对RNA二级结构进行预测。其中CVB3/AS、CVB3/28、CVB3/20、CVB3/Nancy是致胰腺炎和心肌炎的毒株,CVB3/CO是仅致胰腺炎的毒株,CVB3/GA和CVB3/0是非致病毒株。此外用该病毒感染Swiss小鼠,在病毒感染3d、7d、21d、40d、55d分批处死小鼠,检测小鼠的体重、血糖、尿糖,观察小鼠胰腺和心肌组织的病理损伤情况。CVB3/MKP基因组全序列长度为7400bp,开放阅读框架长度为6555bp,编码2185个氨基酸的多聚蛋白前体。5′端非编码区、全长核苷酸序列比对分析结果显示CVB3/MKP株与CVB3/20、CVB3/0、CVB3/28相似性在99.4~99.6%,处于系统发生树的同一分支。氨基酸序列分析有7个位点发生了独特变异。预测的RNA二级结构发现,CVB3/MKP与CVB3/20和CVB3/28仅有一个核苷酸差别,RNA二级结构基本一致;与CVB3/AS存在15个核苷酸位点的差异,但RNA二级结构却极为相似;与CVB3/CO和CVB3/GA二者无论在核苷酸序列还是RNA二级结构上都有显著不同,说明CVB3/MKP与致胰腺炎和心肌炎的CVB3/28毒株亲缘关系极为密切,进而通过动物实验证实了CVB3/MKP的胰腺毒性及心肌毒性。

全文目录


内容提要  5-8
英文缩写词表  8-10
前言  10-12
第一篇 文献综述  12-27
  第一章 柯萨奇病毒CVB3研究进展  12-27
    一、柯萨奇病毒的一般特征  13-14
    二、柯萨奇病毒B3基因组结构及其编码产物的功能  14-18
    三、柯萨奇病毒的复制及生物合成  18-19
    四、柯萨奇病毒流行病学特点  19-21
    五、致病机理  21-22
    六、柯萨奇病毒的同源性的研究  22-23
    七、CVB3基因组核苷酸变异与毒力的关系  23-24
    八、CVB 的诊断与防治  24-27
第二篇 实验研究  27-79
  第一章 实验材料与方法  27-41
    第一节 实验材料  27-30
      一、菌种、细胞及病毒  27
      二、主要仪器设备  27-28
      三、实验动物  28
      四、主要试剂  28-29
      五、主要溶液配制  29-30
    第二节 实验方法  30-41
      一、CVB3/MKP 的扩增及滴度测定  30-32
      二、CVB3/MKP 全基因组序列测定及分析  32-39
      三、CVB3/MKP 对Swiss 小鼠胰腺、心肌组织的影响  39-41
  第二章 实验结果  41-70
    第一节 CVB3/MKP 全基因组序列测定及分析  41-64
      一、CVB3/MKP 各基因片段的RT-PCR 扩增结果  41-42
      二、CVB3/MKP 各基因片段的克隆及质粒的酶切鉴定  42-44
      三、CVB3/MKP 各基因片段测序与序列拼接  44-53
      四、CVB3/MKP 5′端非编码区核苷酸同源性比较  53-54
      五、CVB3/MKP 5′端非编码区系统发生树分析  54-55
      六、CVB3/MKP 5′端非编码区 SLII 区域的 RNA 二级结构的预测  55-57
      七、CVB3/MKP 全长序列的核苷酸同源性比较及系统发生树分析  57-58
      八、CVB3/MKP 编码区氨基酸同源性比较分析  58-64
    第二节 CVB3/MKP 对Swiss 小鼠胰腺和心肌影响  64-70
      一、CVB3/MKP 滴度的测定  64
      二、CVB3/MKP 对小鼠体重的影响  64
      三、CVB3/MKP 对小鼠血糖和尿糖的影响  64-65
      四、胰腺组织学观察结果  65-66
      五、胰腺免疫组织化学检测结果  66-67
      六、心肌组织学观察结果  67-68
      七、心肌免疫组织化学检测结果  68-70
  第三章 讨论  70-78
  第四章 结论  78-79
参考文献  79-87
附录：CVB3/MKP 全基因序列测序结果图  87-103
攻读博士学习期间发表的论文及其它成果  103-106
中文摘要  106-110
ABSTRACT  110-115
致谢  115-116
导师及作者简介  116

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学） > 人体病毒学（致病病毒） > 肠道病毒与肝炎病毒 > 柯克萨基（Coxsackie）族
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