学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

中间球海胆与光棘球海胆的杂交及分子遗传学研究

作　者: 周遵春
导　师: 包振民
学　校: 中国海洋大学
专　业: 海洋生物
关键词: 中间球海胆 光棘球海胆 杂交 分子标记 遗传连锁图谱 MYP基因表达
分类号: S917.4
类　型: 博士论文
年　份: 2006年
下　载: 149次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


本文以中间球海胆（Strongylocentrotus intermedius）、光棘球海胆（S. nudus）及其杂交的F1代为材料,通过分子标记、构建遗传连锁图谱及基因表达差异等分子遗传学技术对两种海胆杂交产生的包括杂交优势在内的遗传变异进行了相关的研究,为海胆杂交育种提供了遗传学依据。主要内容包括:1杂交海胆的分子鉴定及生物学性状特征。1.1从24对SSR引物中筛选出一对,能对父母本和杂交种的基因组DNA进行有效扩增,并且扩增条带清晰稳定。利用杂交海胆中同时拥有父母本的互补带型,对杂交海胆进行了分子鉴定。1.2杂交海胆的外部形态特征介于双亲之间,正反交的F1代壳色、棘色等形态特征接近,都有两种表型（一种壳为紫褐色,棘发白、尖部略紫;另一种壳和棘均为紫色）,并且两种表型所占比例不同,壳径在1cm左右时正交F1代（中间球海胆♀×光棘球海胆♂）中为74.0%和26.0%,反交F1代（光棘球海胆♀×中间球海胆♂）中各占68.1%和31.9%;壳径3cm左右时正交F1代为77.2%和22.8%,反交F1代各占70.5%和29.5%。正交F1代的生殖腺重、壳径、体重等平均值都比母本具有不同程度的优势,有的时间达到显著水平。有近10%的杂种生殖腺颜色不如母本鲜艳。2杂交海胆（中间球海胆♀×光棘球海胆♂）群体多样性的AFLP分析及AFLP标记与数量性状的相关性分析。2.1对光棘球海胆（NU）、中间球海胆（IN）及其杂交的F1代（中间球海胆♀×光棘球海胆♂）（HYb,HYc两种表型）3个群体进行了AFLP分析,并根据遗传距离进行了个体聚类分析。结果表明:3个群体的多态位点比例分别是:81.99%,80.51%和95.95%。香农多样性指数分别为:0.2331±0.1273, 0.2005±0.1385和0.2625±0.1067。遗传相似度分别为: 0.6876±0.0523, 0.6501±0.0548和0.6552±0.0553。分子方差分析（AMOVA）分析结果表明,变异来源有25.39%来自群体间,有74.61%来自群体内。尽管杂交海胆在表型上可以明显分成两种类型,但是通过AFLP统计的遗传距离进行的个体聚类却聚在一起,不能分成两个群体。2.2对杂交海胆的生殖腺、壳径、体重、棘长等数量性状与AFLP标记进行

全文目录


摘 要  5-7
Abstract  7-14
第一章 文献综述  14-50
  1 海胆研究历史概述  15-17
  2 海胆杂交研究现状  17-19
  3 杂交育种的分子遗传学研究  19-48
    3.1 分子标记的发展和应用  20-30
      3.1.1 同工酶标记（Allozyme markers）  22-23
      3.1.2 线粒体DNA标记（Mitochondrial DNA markers）  23-24
      3.1.3 RFLP标记（Restriction fragment length polymorphism）  24-25
      3.1.4 RAPD （Random amplified polymorphic DNA）  25-26
      3.1.5 AFLP（Amplified fragment length polymorphism）标记  26-27
      3.1.6 SSR(Single sequence repeats)标记  27-28
      3.1.7 SNP (Single nucleotide polymorphism) 标记  28-29
      3.1.8 ESTs（Expressed sequence tags）标记  29-30
    3.2 遗传连锁图谱及其应用  30-36
      3.2.1 基因作图的主要种类  30-31
      3.2.2 构建遗传连锁图的方法  31-32
      3.2.3 遗传连锁图的应用  32-34
      3.2.4 水产生物的遗传连锁图研究现状  34-36
    3.3 分子标记在杂种优势预测中的应用  36-41
      3.3.1 杂交育种的遗传学原理与方法  36
      3.3.2 杂种优势的遗传学基础  36-38
      3.3.3 分子标记预测杂种优势  38-41
    3.4 基因克隆及表达差异的研究  41-48
      3.4.1 基因克隆常用的方法  41-44
      3.4.2 基因表达差异的分析  44-48
  4 本研究的目的和意义  48-50
第二章 中间球海胆(Strongylocentrotus intermedius)×光棘球海胆（S.nudus)杂交种的分子鉴定及生物学性状特征  50-70
  第一节 利用微卫星标记对中间球海胆×光棘球海胆杂交种的鉴定  50-56
    0 引言  50-51
    1 材料与方法  51-52
      1.1 实验材料  51
      1.2 微卫星引物筛选  51
      1.3 DNA 提取及 PCR 检测  51-52
    2 实验结果  52-53
    3 讨论  53-56
      3.1 微卫星标记鉴定杂种的意义  53-54
      3.2 微卫星引物的筛选  54
      3.3 微卫星标记鉴定杂交种的应用前景  54-56
  第二节 中间球海胆×光棘球海胆 F_1代的生物学性状特征  56-70
    0 引言  56-57
    1. 材料和方法  57-58
      1.1 材料  57
        1.1.1 材料来源  57
        1.1.2 取样及测量方法  57
      1.2 数据统计方法  57-58
    2 结果  58-65
      2.1 杂交海胆的外部形态特征  58-59
      2.2 杂交海胆的生殖腺色泽表现  59-61
      2.3 杂交海胆的生长表现  61-65
        2.3.1 正交（IN♀×NU♂）F_1代不同时期的生长表现  61-64
        2.3.2 正交（IN♀×NU♂）F_1代的超亲优势  64
        2.3.3 反交（NU♀×IN♂）F_1代的生长表现  64-65
    3 讨论  65-69
      3.1 正交海胆材料的选取和取样时间的确定  65-66
      3.2 正交组与对照组外部特征及生殖腺色泽  66-67
      3.3 正交组与对照组生长表现  67-68
        3.3.1 主要数量性状的测量标准  67
        3.3.2 正交组与对照组数量性状的差异  67-68
        3.3.3 正交杂种的超母本优势  68
      3.4 正反交F_1代的生物学性状差异  68-69
    4 小结  69-70
第三章 杂交海胆(中间球海胆♀×光棘球海胆♂)群体遗传多样性的 AFLP 分析及AFLP 标记与数量性状的相关性分析  70-94
  第一节 中间球海胆、光棘球海胆及杂交 F_1代（中间球海胆♀×光棘球海胆♂)群体的AFLP分析  70-80
    0 引言  70-71
    1 材料与方法  71-73
      1.1 实验材料  71
      1.2 DNA 提取  71
      1.3 AFLP分析  71-72
      1.4 数据的处理与分析  72-73
    2 实验结果  73-75
      2.1 中间球海胆、光棘球海胆及其杂交 F_1代 AFLP 扩增谱带统计  73-74
      2.2 三个群体的遗传结构及遗传多样性分析  74-75
      2.3 聚类分析  75
    3 讨论  75-80
      3.1 群体遗传多样性分析参数的选取  77
      3.2 亲本数目对杂交子代群体结构的影响  77-78
      3.3 子代群体的遗传组成及其与两亲本的遗传关系  78
      3.4 海胆杂交对育种及生态研究的意义  78-80
  第二节 杂交海胆（中间球海胆 Strongylocentrotus intermedius♀×光海棘球胆Strongylocentrotus nudus♂）的数量性状与AFLP 标记的相关性分析  80-94
    0 引言  80-81
    1 材料与方法  81-82
      1.1 材料  81
      1.2 DNA 提取  81
      1.3 AFLP分析  81-82
      1.4 数据处理  82
        1.4.1 分组方法  82
        1.4.2 单因素方差分析(ANOVA)  82
    2 结果  82-90
      2.1 杂交海胆的一些主要的数量性状表型分析与变异  82-83
      2.2 杂交海胆群体的AFLP分析  83
      2.3 单因子方差分析法(ANOVA)检测与数量性状相关联的 AFLP 标记  83-89
        2.3.1 与杂交海胆生殖腺重相关的标记  84-85
        2.3.2 与杂交海胆壳径相关的标记  85-86
        2.3.3 与海胆体重相关的标记  86-88
        2.3.4 与海胆棘长相关的标记  88-89
      2.4 位点一致性的比较  89-90
    3 讨论  90-92
      3.1 标记与性状关联分析的方法及意义  90
      3.2 QTL 的多效性和互作  90-92
    4 小结  92-94
第四章 光棘球海胆与中间球海胆遗传连锁图谱的构建  94-110
  0 引言  94-95
  1 材料和方法  95-98
    1.1 作图群体  95
    1.2 DNA 提取及AFLP分析  95-96
    1.3 分离比分析  96
    1.4 图谱构建  96-97
    1.5 图谱的长度及覆盖率  97
    1.6 AFLP标记的分布  97-98
  2 结果  98-104
    2.1 多态性水平  98-99
    2.2 分离比分析  99-100
    2.3 连锁图构建  100-104
    2.4 图谱长度和覆盖率  104
    2.5 AFLP 标记的分布  104
  3 讨论  104-108
    3.1 AFLP 标记的多态性水平  104-105
    3.2 偏分离  105-106
    3.3 光棘球海胆和中间球海胆的遗传连锁图  106
    3.4 图谱长度和覆盖率  106
    3.5 AFLP标记的分布  106-107
    3.6 AFLPs 在海胆育种上的应用  107-108
  4 小结  108-110
第五章 杂交海胆 MYP 基因转录表达差异的研究  110-134
  第一节 光棘球海胆的MYP 基因的cDNA 序列分析  112-122
    0 引言  112-113
    1 材料与方法  113-115
      1.1 RNA 的提取  113
      1.2 RT-PCR 反应  113
      1.3 LA PCR 扩增及 PCR 产物回收  113-114
      1.4 cDNA 测序及分析  114
      1.5 MYP 进化分析  114-115
    2 结果  115-120
      2.1 产物检测  115
      2.2 光棘球海胆MYPcDNA 核苷酸及推导氨基酸全序列  115-117
      2.3 光棘球海胆与其他海胆MYP 氨基酸序列差异  117-118
      2.4 光棘球海胆 MYP 与铁输送蛋白保守结构域  118-119
      2.5 系统进化分析  119-120
    3 讨论  120-122
      3.1 光棘球海胆与其他海胆的分类地位  120
      3.2 光棘球海胆主要卵黄蛋白基因的特点及功能  120-122
  第二节 MYP基因在中间球海胆及杂交海胆(S.intermedius♀×S.nudus♂)生殖腺不同发育时期的转录表达差异  122-134
    0 引言  122-123
    1 材料和方法  123-125
      1.1 材料  123
      1.2 方法  123-125
        1.2.1 不同生殖腺发育期的鉴别  123
        1.2.2 RNA的提取  123
        1.2.3 引物设计和筛选  123-124
        1.2.4 RT-PCR  124
        1.2.5 Real Time RT-PCR  124
        1.2.6 MYP表达的相对浓度的计算  124-125
    2 结果  125-130
      2.1 雌雄生殖腺的鉴定及分期  125-128
      2.2 RT-PCR的半定量结果  128-129
      2.3 实时荧光定量PCR的结果  129-130
    3 讨论  130-134
      3.1 杂交海胆的生殖腺分期  130-131
      3.2 RT-PCR 条件的优化  131-132
      3.3 杂交海胆与中间球海胆MYP基因的表达  132
      3.4 基因表达差异与杂种优势  132-134
第六章 总结与展望  134-135
主要参考文献  135-155
已接收和整理的第一作者文章  155-156
致谢  156

相似论文

  1. 大豆疫霉RXLR效应分子靶标的筛选,S435.651
  2. 利用AFLP标记对四个多鳞鱚群体的遗传结构分析,S917.4
  3. 甘蓝型油菜多体附加系“Nj08-063”的农艺性状、细胞学与分子学鉴定研究,S565.4
  4. 棉花纤维初始发育期14-3-3相互作用蛋白的酵母双杂交筛选,S562
  5. 桃杂交后代（F1）幼苗光合效能评价,S662.1
  6. 不同沙土配比对践踏后杂交狗牙根草坪恢复能力的影响,S688.4
  7. 杨柳田头菇生活史及分类地位研究,S646
  8. 鸭源鸡杆菌抗体消长规律研究及抗脂多糖单抗杂交瘤细胞株的建立,S858.32
  9. 溶藻弧菌诱导红笛鲷仔鱼差减文库的构建及其表达序列标签分析,S943
  10. 稳定分泌抗羊种布鲁菌脂多糖单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立,R392
  11. 马链球菌兽疫亚种类M蛋白与猪血管内皮细胞互作蛋白筛选,S852.611
  12. FISH检测多粘类芽孢杆菌研究及其在猪粪有机肥和土壤中的应用,S144
  13. 黄瓜渐渗系抗南方根结线虫病遗传规律及分子标记研究,S436.421
  14. 黄瓜—酸黄瓜抗霜霉病渐渗系分子标记的筛选及细胞程序性死亡相关基因的表达分析,S436.421.11
  15. 6个双列杂交玉米亲本及其杂交株系的生长及光合特性差异分析,S513
  16. 涉及大赖草7Lr染色体的普通小麦—大赖草易位系的分子细胞学鉴定,S512.1
  17. 一个新的小麦白粉病抗性基因的发现与分子标记定位,S512.1
  18. 甘蓝型油菜与播娘蒿远缘杂交杂种后代的筛选,S565.4
  19. 簇毛麦6V染色体短臂小片段易位系的分子细胞遗传学鉴定,S512.1
  20. 荆州黑麦6R染色体抗白粉病基因的定位及分子标记,S512.1
  21. 陆地棉矮化突变体Ari1327的形态、生理和分子标记研究,S562

中图分类: > 农业科学 > 水产、渔业 > 水产基础科学 > 水产生物学 > 水产动物学
© 2012 www.xueweilunwen.com