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草莓离体雌核发育的研究

作　者: 王文和
导　师: 吴禄平
学　校: 沈阳农业大学
专　业: 果树学
关键词: 草莓未受精子房离体培养雌核发育
分类号: S668.4
类　型: 博士论文
年　份: 2001年
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内容摘要

本文以草莓为试材,通过对未受精子房的离体培养,诱导了雌核发育,并获得了染色体数减半的胚囊植株。对影响诱导效果的各因素作了比较分析,对胚囊植株染色体倍性进行了鉴定,对草莓的胚胎学和诱导后的雌核发育过程进行了详细研究,主要实验结论如下: 1.首次对草莓未受精子房进行了离体培养,诱导了雌核发育,并获得了染色体数减半的胚囊植株。这是继草莓花粉植物后,开辟的获得草莓单倍体植株的又一条途径。 2.基因型、激素的种类和浓度、蔗糖浓度、低温预处理时间、材料生长环境及发育状况、培养条件等是影响诱导草莓未受精子房雌核发育的主要因素。不同基因型草莓品种对诱导效果的影响表现为:明旭、丰香、实生、天津5号、UC10、J10、EMC可被诱导,而哈尼、弗州草莓、新疆3号等则未能被诱导;激素种类和浓度对诱导效果的影响是:添加生长素类物质2,4-D是成功诱导所必需的,而且当2,4-D浓度小于2.0mg/L时,诱导效果随2,4-D浓度增大而增大,2mg/L2,4-D为最佳诱导浓度。添加细胞分裂素类物质KT、BA则抑制雌核发育而促进体细胞愈伤组织的增生,对诱导不利;蔗糖浓度对诱导效果的影响表现为:当蔗糖浓度低于6%时诱导效果随蔗糖浓度增大而增大,当蔗糖浓度高于6%后结种率则下降;在4℃低温条件下,不同预处理时间对诱导效果的影响表现为:低于48h诱导结种率随预处理时间增长而增大,高于48h结种率则下降,预处理48h为最佳:材料生长环境及发育状况对诱导效果的影响按诱导率的由高到低依次是:春季露地苗一级花蕾、春季露地苗二级花蕾、保护地苗一级花蕾、保护地苗二级花蕾;有利的前期培养条件为:25℃/16℃变温黑暗>25℃/16℃变温光照黑暗交替>25℃恒温黑暗>25℃/16℃变温光照>25℃恒温光照培养。 3.建立了高频、稳定、可重复的诱导草莓染色体数减半的胚囊植株的再生实验体系。选用春季露地栽培的八倍体草莓品种“明旭”,取其开花前2d的

全文目录

中文摘要  9-11
英文摘要  11-14
第一章前言  14-29
  1.1 未受精子房和胚珠离体诱导单倍体植株的研究概况  14-17
  1.2 影响未受精子房和胚珠离体培养效果的各种因素  17-23
    1.2.1 供体材料的基因型  17-18
    1.2.2 供体材料的发育条件状况  18
    1.2.3 接种材料的发育时期  18-19
    1.2.4 外植体的组成部分  19
    1.2.5 基本培养基  19-20
    1.2.6 外源激素  20-21
    1.2.7 蔗糖浓度  21
    1.2.8 有机添加物  21-22
    1.2.9 固体与液体培养基  22
    1.2.10 接种方式  22
    1.2.11 培养条件  22-23
  1.3 未受精子房或胚珠离体培养中雌核发育的胚胎学研究  23-29
    1.3.1 胚珠中胚囊的发育  24-25
    1.3.2 胚胎发生的雌核发育模式  25-27
    1.3.3 自发胚乳的离体诱导  27-29
第二章草莓未受精子房的离体培养  29-39
  2.1 引言  29
  2.2 材料和方法  29-30
    2.2.1 材料  29-30
    2.2.2 方法  30
  2.3 结果与讨论  30-39
    2.3.1 外源激素对草莓未受精子房离体诱导的影响  30-32
    2.3.2 蔗糖浓度对草莓未受精子房离体诱导的影响  32-33
    2.3.3 不同基因型对草莓未受精子房离体诱导的影响  33-35
    2.3.4 低温预处理对草莓未受精子房离体诱导的影响  35-36
    2.3.5 外植体的生长环境及发育状况对草莓未受精子房离体诱导的影响  36-37
    2.3.6 培养条件对草莓未受精子房离体诱导的影响  37-39
第三章离体诱导的草莓胚囊植株的特征  39-45
  3.1 草莓胚囊植株的获得  39-40
  3.2 诱导的胚囊植株的形态学特征  40-42
  3.3 胚囊植株的倍性鉴定  42-45
    3.3.1 细胞学方法  42
    3.3.2 流式细胞光度术(Flow Cytometric Measurement)法  42-45
第四章草莓未受精子房离体雌核发育的胚胎学研究  45-50
  4.1 引言  45
  4.2 材料及培养方法  45
  4.3 制样技术  45-46
    4.3.1 爱氏苏木精整体染色——石蜡切片法  45-46
    4.3.2 整体染色—冬青油透明—石蜡切片法  46
    4.3.3 解剖——整体透明法  46
  4.4 观察与摄影  46
  4.5 结果与分析  46-50
    4.5.1 卵细胞的孤雌生殖  47
    4.5.2 反足细胞的启动分裂  47
    4.5.3 未受精极核的分裂  47-48
    4.5.4 双胚囊  48
    4.5.5 胚状体的发育模式  48-50
第五章草莓的胚胎发育  50-54
  5.1 材料与方法  50-51
    5.1.1 材料及固定  50
    5.1.2 制样技术  50-51
  5.2 观察和摄影  51
  5.3 结果  51-54
    5.3.1 雌蕊的结构特征  51
    5.3.2 雌配子体的发育  51-52
    5.3.3 胚胎发育  52
    5.3.4 胚乳的发育  52-53
    5.3.5 双胚囊现象  53-54
第六章讨论  54-65
  6.1 草莓离体雌核发育最适诱导条件的探讨  54-56
  6.2 离体诱导草莓未受精子房获得染色体数减半的胚囊植株的意义  56-57
  6.3 胚囊植株染色体倍性状况  57-59
  6.4 草莓胚囊植株的形态特征  59-61
  6.5 流式细胞光度术(FCM)测定细胞核DNA含量  61
  6.6 草莓胚囊植株的起源和发育  61-62
  6.7 关于整体透明和显微解剖相结合在研究植物胚胎学中的应用  62-63
  6.8 关于草莓的多胚囊及无融合生殖  63-65
第七章结论  65-67
参考文献  67-76
图版说明  76-109
在读期间发表的论文及著作  109-110
致谢  110

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