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人臂丛神经损伤后肌肉萎缩的蛋白质组学研究

作　者: 贾林芝
导　师: 张志鸿
学　校: 复旦大学
专　业: 生物物理学
关键词: 肌肉萎缩蛋白质表达二头肌胸锁乳突肌比较蛋白质组学裂解液失神经分子机制臂丛损伤人类疾病
分类号: R746
类　型: 博士论文
年　份: 2005年
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内容摘要

臂丛神经损伤是上肢致残的主要因素之一。20世纪70年代后,我国科学家通过膈神经移位治疗臂丛神经损伤,并首创健侧颈7神经移位方法,在术后手功能恢复上取得较大的进展,但手内肌功能的恢复仍处于起步阶段。随着对臂丛损伤研究的深入和新术式的出现,对臂丛损伤的精确诊断提出了要求。而新的诊断方法的建立,要在阐明肌肉萎缩的分子机制的基础上进行。本文从比较蛋白质组学的角度,对比人臂丛神经损伤后,萎缩的二头肌和小指展肌与正常胸锁乳突肌的蛋白质表达模式,以期找到导致肌肉萎缩进程的关键蛋白质,为臂丛神经损伤的临床诊断、治疗和预后检测提供可能的分子标记;并在此基础上,更进一步地探索失神经后肌肉萎缩的分子机制;同时也为人类疾病蛋白质组数据库,提供正常/萎缩人骨骼肌蛋白质表达的二维电泳图谱,完善人类疾病蛋白质组数据库。我们使用了5种不同成分的裂解液,试验了一步抽提法和分步抽提法,通过对各种方法和不同裂解液效果的对比,经过抽提方法和上样、聚焦条件的优化,我们最终采用了含有CHAPS和SB3-10的裂解液作为对病人骨骼肌样品的抽提裂解液;为了得到更易于分析的二维电泳图谱,我们使用了17cm的非线性预制胶条,等电聚焦56,000vhr;最终得到了较好的重复性,以及在一张二维电泳凝胶上分离800多个蛋白质点的较高的分辨率。利用PD-Quest软件对每张凝胶经过点探测、点匹配和归一化之后,建立一个包括9例病人的失神经萎缩的二头肌、小指展肌和作为对照组的健康胸锁乳突肌的凝胶图像的Matchset。以18张萎缩肌肉的凝胶图像为实验组,9张健康肌肉的凝胶图像为对照组,做Student-t test。与对照组相比,表达水平有显著性差异(P<0.05)的蛋白质有30个。在这30个点中,有6个蛋白质点的表达在萎缩肌肉中升高,其余24个则降低;另有2个两个肌球蛋白质轻链的亚基,由于丰度较高,变化十分显著,在有些病例中几乎完全消失。此外,将这30个有表达差异蛋白质的表达水平进行进一步的分析,比较二头肌和小指展肌中他们表达量的差异,其中表达差异有一倍以上的蛋白质有7个。对这些候选蛋白质进行基质辅助激光解析电离—飞行时间质谱(Matrix-assisted laser desorption ionization mass spectrometry-time of fly; MALDI-TOF)分析,得到这些蛋白质的肽指纹图谱,并在网上数据库进行搜索,得到了对其中7个表达差异蛋白质的鉴定;这些在萎缩肌肉中有表达差异的蛋白质是:人肿瘤蛋白hD54;SIPL蛋白/理论性蛋白,FLJ10913;含锰的超氧化物歧化酶(Manganese superoxide dismutase;

全文目录

摘要  4-7
Abstract  7-10
缩略词表  10-12
第一章前言  12-17
第二章实验材料、原理和方法  17-27
  第一节比较蛋白质组学方法  17-23
  第二节 DnaJC1原核表达重组子的建  23-27
第三章结果  27-58
  第一节候选蛋白质的识别与鉴定  27-28
  第二节 DnaJC1的体外表达  28-58
第四章讨论与小结  58-75
  第一节人骨骼肌蛋白质的二维电泳图谱  58-59
  第二节人骨骼肌失神经萎缩后蛋白质表达水平的变化  59-64
  第三节 DnaJC1的体外表达  64-65
  第四节小结与展望  65-68
  参考文献  68-75
第五章综述  75-113
  第一节蛋白质组学在疾病研究中的应用  75-91
  第二节肌肉萎缩的机制  91-97
  第三节肌肉的蛋白质组学研究进展  97-99
  参考文献  99-113
第六章论文发表情况  113-114
致谢  114-115
论文独创性声明  115

人臂丛神经损伤后肌肉萎缩的蛋白质组学研究

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