学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

衰老成纤维细胞中Stat3的核定位及其对AngⅡ诱导TIMP-1表达上调的作用

作　者: 王小丹
导　师: 樊代明；陈香美
学　校: 中国人民解放军第四军医大学
专　业: 内科学
关键词: 复制衰老 AngⅡ 信号转导 Stat3 TIMP-1
分类号: R339.38
类　型: 博士论文
年　份: 2003年
下　载: 129次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


衰老（Senescence）是指在细胞、组织水平的生理机能的进行性丢失，是众多不同的生理刺激激发细胞出现的一种最终的共同状态。大量实验证明信号通路与衰老的起始和持续密切相关。本实验以用于研究体外复制衰老的人胚肺二倍体成纤维细胞WI-38细胞为模型，探讨细胞复制衰老过程中JAK／STAT信号通路的主要成员Stat3活性的变化、MMPs／TIMPs系统的变化、AngⅡ的作用及AngⅡ调控下游基因表达的有关信号通路，揭示衰老发生的机制。 第一部分实验采用Western blotting、间接免疫荧光和EMSA等方法。结果显示：AngⅡ通过其AT1受体诱导WI-38细胞Stat3、Stat1的磷酸化，形成以磷酸化的Stat3同源二聚体SIF-A为主的复合物转位入核；AngⅡ以量效、时效的方式诱导SIF-DNA的结合，10-7M或10-6M的AngⅡ刺激细胞60min能够最大强度的诱导SIF-DNA的结合，说明AngⅡ能够活化WI-38细胞中JAK／STAT信号通路。 第二部分实验结果显示，细胞在复制衰老过程中，Stat3的活性组成型或生长因子刺激后都有改变。应用Northern blotting检测了年轻细胞和衰老细胞中Stat3 mRNA的表达，结果发现衰老细胞中Stat3 mRNA的表达与年轻细胞比无明显的差别，而Western blotting示衰老细胞中Stat3蛋白的 第四军医大学博士研究生论文表达明显高于年轻细胞，其活性形式磷酸化的Stat3中Stat3)的表达也不低于年轻细胞；Aug 11刺激细胞后，无论年轻细胞还是衰老细胞，Aug 11都能以同样强度诱导胞浆中Stat3的磷酸化，但在衰老细胞核中，无论是组成型的或Aug 11刺激后的，pstat3蛋白水平都明显低于年轻细胞，提示衰老细胞中pstat3转位入核受阻；在衰老细胞中，Aug 11同样以量效、时效的方式，通过其AT；受体诱导Sff－DNA结合，10”’M的Aug 11刺激衰老细胞45－60min能够最大强度的诱导Sff－DNA的结合。由前两部分实验结果可推测出细胞复制衰老过程中，信号转导分子与基因组DNA结合活性所发生的变化，可能影响下游基因的表达。 第三部分实验的明胶酶谱结果显示：WI－3 8细胞主要分泌 MMP－2，且年轻细胞中的MMP－2活性明显强于衰老细胞，年轻细胞和衰老细胞中＊＊P9的活性均较弱，两者之间无明显差别：An gll刺激细胞48h时，年轻细胞和衰老细胞中MMP－二的活性稍有增加，两者之间无差别，而Aug 11对 MMP一的活性无明显影响。衰老细胞中组成型的 TIMP上的表达明显高于年轻细胞，且 Aug 11可明显上调衰老细胞 TIMPq的表达，在Aug 11刺檄衰老细胞 6h时，TWl蛋白的表达己开始上调，12h达峰值，48h时降至基础水平。考虑到TIMP刁启动子区含有S丁结合位点，Aug11有可能通过STAT通路调控TM－l的表达，为此进行了细胞转染实验，结果显示转染Stat3反义质粒、Stat3显性负调突变体质粒及Stat3反义寡核苦酸的衰老细胞，用 Aug 11刺激后，上调的 TIMP＊的表达明显受抑，说明 Aug 11通过 STAT通路上调衰老细胞 TIMP刁的表达。由此可以想象在衰老细胞中TIMP－l等的组成型表达或生长因子诱导表达增加，可通过抑制MMP－9的活性来促进维持正常状态，形成衰老特异的生理、形态的变化。在细胞衰老过程中，M：MPs／TIMPS比率的下降，通过抑制永生细胞的出现，在避兔肿瘤的形成中起着主要的作用。推测下调TIMP－l等表 4达的细胞因子或生长因子可能与肿瘤的发生有关。相反，上调TIMP－1表达的可能与衰老或硬化有关。 总之，细胞复制衰老过程中Stat3活性下降，不是衰老细胞Stat3磷酸化的减少，而是活化的 Stat3核转位受阻；Aug 11可以诱导衰老细胞Stat3．DNA的结合；WI－3 8细胞主要分泌 MMP－2，其活性在衰老细胞中明显低于年轻细胞；衰老细胞TIMPl 蛋白的表达明显高于年轻细胞，Aug 11能够上调衰老细胞 TIMPl的表达，这一作用依赖于 Stat3的活化。从本实验可以看出，STAT信号通路介导了衰老信号，参与调控下游基因的表达。本研究初步揭示了衰老细胞形态、生理功能发生改变的分子机制，Aug 11参与衰老的机理，提示通过应用 ACEI或 ATI RA阻断 RAS系统，直接或间接干预 Aug 11的信号通路，可阻滞 Aug 11上调 T侧l的表达，有可能成为延缓衰老、组织硬化进程的有效方法。

全文目录


英文缩写及中英文对照  5-7
中文摘要  7-10
英文摘要  10-13
前言  13-15
第一部分 人胚肺二倍体成纤维细胞WI-38中AngⅡ的JAK／STAT信号转导途径  15-27
第二部分 细胞复制衰老过程中Stat3活性的变化及AngⅡ的影响  27-38
第三部分 细胞复制衰老过程中MMPs／TIMPs活性／表达的变化及AngⅡ的作用  38-49
总结  49-50
参考文献  50-60
致谢  60-61
文献综述  61-74
  细胞复制衰老过程中信号转导分子变化的研究进展  61-74
附录: 在读期间发表文章  74

相似论文

  1. STAT3、MMP-2在肝细胞癌中的临床意义,R735.7
  2. 三个棉花生长素信号转导途径相关基因的克隆与鉴定,S562
  3. 脱氧雪腐镰刀菌烯醇诱导仓鼠肾细胞凋亡信号转导机制的研究,S856.9
  4. 脱氧雪腐镰刀菌烯醇诱导人结肠癌细胞凋亡线粒体信号转导机制的研究,R735.35
  5. 槲皮素对人膀胱癌细胞EJ的生物活性及其对STAT3信号通路的影响,R737.14
  6. 阿托伐他汀对大鼠局灶性脑缺血再灌注的脑保护作用及对脑MMP-9、TIMP-1表达的影响,R743.33
  7. 藤黄酸对肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响及其对STAT3基因表达的调控作用,R734.2
  8. CD59 CD55脂筏效应在T细胞活化信号转导中的作用研究,R392.12
  9. CD59-CD2融合蛋白真核表达载体的构建及对T细胞信号转导的作用研究,R392.1
  10. MMP-1和TIMP-1在末端病大鼠跟腱末端组织的表达及其针刺干预作用,R87
  11. 选择复制性腺病毒M4对卵巢癌细胞系体外治疗作用及机制的初步探讨,R737.31
  12. 人巨细胞病毒影响滋养细胞B7-H1表达水平的体外实验研究,R714.2
  13. 阿托伐他汀对实验性脑出血大鼠脑组织中MMP-9、TIMP-1表达变化影响的研究,R965
  14. SOCS1沉默增强树突状细胞抗喉癌免疫效应,R739.65
  15. β-连环素及E-钙粘附素在上皮性卵巢肿瘤中的表达及临床意义,R737.31
  16. STAT2在宫颈癌变阶段的表达及生物学功能初探,R737.33
  17. 溃疡性结肠炎癌变小鼠模型中NF-κB和STAT3信号通路作用机制初探,R735.35
  18. 辛伐他汀、氯沙坦对自发性高血压大鼠前列腺增生的作用及机制探讨,R544.1
  19. 中药通心络对糖尿病大鼠心肌纤维化预防作用的实验研究,R285.5
  20. 通脉颗粒对家兔PTCA术后再狭窄及相关炎性因子的影响,R285
  21. 左归丸对去卵巢大鼠骨组织中TGF-β1、Smad4信号转导通路的研究,R285

中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 人体生理学 > 发育及年龄生理 > 衰老
© 2012 www.xueweilunwen.com