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半胱胺对动物生产性能及其营养生理效应研究

作　者: 刘光芒
导　师: 周安国；王之盛
学　校: 四川农业大学
专　业: 动物营养与饲料科学
关键词: 半胱胺 生长 GH-IGF轴 营养代谢组学 代谢 小分子物质代谢
分类号: S816
类　型: 博士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


本论文以大鼠和肥育猪为实验模型,利用营养代谢小分子(分子量小于1000道尔顿)的组学技术和生物大分子的基因表达技术,研究了半胱胺在营养代谢和生理二个层次上的生物效应和分子基础。研究包括三个实验。试验一,以Sprague-Dawley大鼠为模型,采用一次性腹腔注射150mg/kgBW半胱胺后,收集0-8,8-24h的尿液以及24h血清,测定1H核磁共振谱和采用PCA或OSC-PLS的实验资料分析法,研究了短期外源半胱胺补充(一次性引入)对大鼠体内物质代谢的影响,结果表明：①短期外源半胱胺(一次性引入)影响大鼠肠道微生物代谢。明显促进血清乙酸浓度,增加了尿液中二甲胺浓度,降低了0-8h尿液中马尿酸的浓度。②短期外源半胱胺(一次性引入)影响大鼠三羧酸循环代谢。明显表现为0-8h尿液a-酮戊二酸浓度增加、葡萄糖水平降低。半胱胺也降低尿液琥珀酸和柠檬酸浓度。③短期外源半胱胺(一次性引入)影响氮代谢。引起尿液中肌酐、二甲基甘氨酸(0-8h)、肌酸(8-24h)浓度以及血清中甘氨酸含量明显增加,肌酸(0～8h)浓度降低。④短期外源半胱胺(一次性引入)影响脂质代谢。明显降低血清脂蛋白、HDL、VLDL、FA、PUFA、UFA、磷酰胆碱浓度。结论：短期外源半胱胺(一次性引入)影响机体和内源微生物代谢过程。短期半胱胺补充(一次性引入)降低了能量代谢强度,促进了氮代谢,降低了脂肪代谢。试验二,以Sprague-Dawley大鼠为模型,采用多次(共8次,一周2次,星期一四各一次)腹腔注射150mg/kg BW半胱胺后收集0～8,8～24h的尿液以及24h血清,测定1H核磁共振谱和采用PCA或者OSC-PLS的实验资料分析法,研究了长期外源半胱胺补充(多次性引入)对大鼠体内物质代谢的影响。结果表明：①长期外源半胱胺(多次性引入)影响肠道微生物代谢。降低血清乙酸、乙醇、氧化三甲胺、甜菜碱、尿液氧化三甲胺及马尿酸浓度,增加尿液中二甲胺的浓度。②长期外源半胱胺(多次性引入)影响三羧酸循环代谢。减少尿液琥珀酸浓度,降低尿液柠檬酸(8-24h)及尿液中葡萄糖浓度。③长期外源半胱胺(多次性引入)影响氮代谢。提高尿液中二甲基甘氨酸、肌酐(0-8h)、肌酸(8-24h)、尿液以及血清甘氨酸浓度,降低尿液肌酐(8～24h)浓度以及三甲基组氨酸浓度。④长期外源半胱胺(多次性引入)影响脂肪代谢。提高血清HDL水平,降低血清UFA、VLDL和脂蛋白水平。结论：长期外源半胱胺(多次性引入)影响大鼠生理生化参数和小分子物质代谢。减少了三羧酸循环能量代谢强度,降低了蛋白质的降解。刺激微生物的氨基酸和碳水化合物代谢。试验三,选用24头PIC肥育猪(初始体重为60.05±1.24公斤、阉公猪和母猪各半),随机分成3组,分别饲喂基础日粮(对照),70和140 mg/kg半胱胺的实验处理饲粮,实验47天,研究了外源半胱胺对肥育猪生产性能和类胰岛素生长因子系统的影响。结果表明：①饲料添加70 mg/kg外源半胱胺,显著提高肥育猪平均日增重(19.5%)和日采食量(15.2%),不影响料重比。高剂量(140 mg/kg)半胱胺对肥育猪生产性能没有显著影响。②饲料添加70 mg/kg外源半胱胺显著(P<0.05)提高血清生长激素(GH)水平(43.1%)和类胰岛素生长因子-I(IGF-I)含量(55.2%)；显著上调上调肝脏、胃、肌肉生长激素受体(GHR)的mRNA的表达量,分别可达到90%、140%、120%；显著上调肝脏、胃、肌肉IGF-I的mRNA的表达量,分别可达到66%、65%、62%；显著上调胃、十二指肠、肌肉中类胰岛素生长因子-I受体(IGF-IR)的mRNA表达量(分别可达到31%、346%、38%)和肝脏中类胰岛素生长因子结合蛋白-3 (IGFBP-3)的mRNA表达量(119%)；下调胃、十二指肠、肌肉中IGFBP-3的mRNA表达量可达到41%、42%、48%。不影响肝脏、胃、十二指肠、肌肉中胰岛素受体(IR)的mRNA表达；也不影响肝脏IGF-IR和十二指肠中GHR、IGF-I的mRNA表达。③饲料添加140 mg/kg外源半胱胺显著(P<0.05)上调肝脏、胃、十二指肠、肌肉中IGFBP-3的mRNA表达量(114%、212%、196%、194%)；显著下调十二指肠中GHR的水平(22%)以及肝脏、胃、十二指肠、肌肉中IGF-I的mRNA表达量(分别达到46%、51%、42%、54%)和IGF-IR的mRNA表达量(82%、69%、63%、64%)。不影响血清GH、IGF-I水平和肝脏、胃、肌肉GHR的mRNA表达。结论：外源半胱胺调控动物生长、血清IGF-I浓度以及GHR, IGF-I, IGF-IR, IGFBP-3, IR mRNA水平存在显著剂量效应关系。半胱胺调控GHR, IGF-I, IGF-IR, IGFBP-3 mRNA水平有明显地组织特异性。半胱胺促进肥育猪生长,与GH-IGF轴的生理作用有关。综上所述：调控微生物代谢,外源半胱胺长期使用优于短期使用。外源半胱胺通过GH-IGF生理轴介导,减少了三羧酸循环能量代谢强度,降低了脂肪代谢和蛋白质的降解,调控了微生物的氨基酸和碳水化合物代谢,促进了动物生长。

全文目录


摘要  6-9
ABSTRACT  9-12
本文缩略语表  12-13
目录  13-16
第一部分 绪论  16-35
  1. 前言  16-18
  2. 文献综述  18-33
    2.1 半胱胺的研究进展  18-22
      2.1.1 半胱胺的理化性质  18
      2.1.2 半胱胺的生理功能  18-22
        2.1.2.1 调节内分泌  18-20
        2.1.2.2 调节免疫功能  20
        2.1.2.3 缓解应激  20-21
        2.1.2.4 抗氧化  21-22
    2.2 半胱胺对动物体内部分代谢的影响  22-23
      2.2.1 半胱胺对动物部分氮代谢的影响  22
      2.2.2 半胱胺对动物部分脂肪代谢的影响  22-23
      2.2.3 半胱胺对动物部分糖类代谢的影响  23
    2.3 半胱胺对动物生长性能的影响  23-24
    2.4 代谢组学技术及其在营养领域中的应用  24-33
      2.4.1 代谢组学产生的背景  24-25
      2.4.2 代谢组学与其他组学的关系  25-26
      2.4.3 代谢组学研究方法  26-29
        2.4.3.1 样品的采集与制备  26-27
        2.4.3.2 代谢组学分析技术  27-28
        2.4.3.3 数据分析平台  28-29
      2.4.4 代谢组学在营养领域中的应用  29-33
        2.4.4.1 营养代谢组学实验设计  29-30
        2.4.4.2 营养代谢组学与肠道菌群  30
        2.4.4.3 代谢组学在营养领域上的应用  30-33
          2.4.4.3.1 单一营养素的营养代谢组学研究  30-31
          2.4.4.3.2 复杂营养素的营养代谢组学研究  31-32
          2.4.4.3.3 营养与疾病的代谢组学研究  32
          2.4.4.3.4 对食品及营养素的安全性评估  32
          2.4.4.3.5 个性化饮食结构的建立  32-33
  3. 存在问题  33
  4. 本研究的目的、意义及内容  33-34
  5. 技术路线  34-35
第二部分 试验研究  35-90
  试验一 短期半胱胺补充对大鼠体内物质代谢的影响  35-53
    摘要  35
    1. 引言  35-36
    2. 材料和方法  36-39
      2.1 材料  36
        2.1.1 动物与主要试剂  36
        2.1.2 主要仪器  36
        2.1.3 主要耗材  36
      2.2 试验方法  36-39
        2.2.1 试验设计  36-37
        2.2.2 试验日粮与饲养管理  37
        2.2.3 样品的采集与保存  37
        2.2.4 检测指标与方法  37-39
          2.2.4.1 样品处理  37-38
            2.2.4.1.1 尿液处理  37
            2.2.4.1.2 血清处理  37-38
          2.2.4.2 实验方法  38
            2.2.4.2.1 尿液NMR实验  38
            2.2.4.2.2 血清NMR实验  38
          2.2.4.3 数据处理  38-39
            2.2.4.3.1 尿液NMR数据处理  38
            2.2.4.3.2 血清NMR数据处理  38-39
          2.2.4.4 数据分析  39
    3. 结果与分析  39-48
      3.1 短期半胱胺补充对大鼠尿液代谢产物成分的影响  39-43
      3.2 短期半胱胺补充对大鼠血液代谢产物成分的影响  43-48
    4. 讨论  48-52
      4.1 半胱胺对大鼠体内物质代谢影响的营养代谢组学方法建立  48-50
      4.2 短期半胱胺补充对大鼠体内能量代谢、糖代谢、氮代谢以及脂肪代谢的影响  50-51
      4.3 短期半胱胺补充对大鼠体内微生物代谢的影响  51-52
    5. 小结  52-53
  试验二 长期半胱胺补充对大鼠体内物质代谢的影响  53-68
    摘要  53
    1. 引言  53-54
    2. 材料和方法  54-55
      2.1 材料  54
        2.1.1 动物与主要试剂  54
        2.1.2 主要仪器  54
        2.1.3 主要耗材  54
      2.2 试验方法  54-55
        2.2.1 试验设计  54
        2.2.2 试验日粮与饲养管理  54
        2.2.3 样品的采集与保存  54
        2.2.4 检测指标与方法  54-55
          2.2.4.1 尿液处理  54-55
          2.2.4.2 血清处理  55
          2.2.4.3 尿液NMR实验  55
          2.2.4.4 血清NMR实验  55
          2.2.4.5 尿液NMR数据处理  55
          2.2.4.6 血清NMR数据处理  55
          2.2.4.7 数据分析  55
    3. 结果与分析  55-65
      3.1 长期半胱胺补充对大鼠尿液代谢产物成分的影响  55-59
      3.2 长期半胱胺补充对大鼠血液代谢产物成分的影响  59-65
    4. 讨论  65-67
      4.1 长期半胱胺补充对大鼠体内能量代谢、糖代谢、氮代谢以及脂肪代谢的影响  65
      4.2 长期半胱胺补充对大鼠体内微生物代谢的影响  65-67
    5. 小结  67-68
  试验三 半胱胺对肥育猪生产性能及其类胰岛素生长因子系统的影响  68-90
    摘要  68-69
    1. 引言  69
    2. 材料和方法  69-77
      2.1 材料  69-70
        2.1.1 主要试剂  69
        2.1.2 主要仪器  69-70
        2.1.3 主要耗材  70
      2.2 试验方法  70-77
        2.2.1 试验设计  70
        2.2.2 试验日粮配制  70-71
        2.2.3 试验动物饲养管理  71-72
        2.2.4 试验样品的制备  72
        2.2.5 检测指标与方法  72-77
          2.2.5.1 生产性能  72
          2.2.5.2 血清中GH、IGF-I的测定  72
          2.2.5.3 组织总RNA的提取与质量检测  72-74
            2.2.5.3.1 总RNA的提取  72-73
            2.2.5.3.2 DNase I处理  73
            2.2.5.3.3 RNA质量和浓度检测  73-74
            2.2.5.3.4 组织总RNA的反转录(RT)  74
          2.2.5.4 反转录产物cDNA的PCR  74-75
          2.2.5.5 DNA琼脂糖凝胶电泳分析  75
          2.2.5.6 标准品的获得  75-76
          2.2.5.7. 各基因的Real Time PCR  76-77
      2.3 数据处理与统计分析  77
    3. 结果与分析  77-87
      3.1 半胱胺对肥育猪生产性能和血清GH和IGF-I的影响  77
      3.2 肥育猪各组织管家基因β-actin的Real Time PCR  77-79
      3.3 半胱胺对肥育猪各组织GHR基因表达的影响  79-80
      3.4 半胱胺对肥育猪各组织IGF-I基因表达的影响  80
      3.5 半胱胺对肥育猪各组织IGF-IR基因表达的影响  80-81
      3.6 半胱胺对肥育猪各组织IGFBP-3基因表达的影响  81-85
      3.7 半胱胺对肥育猪各组织IR基因表达的影响  85-87
    4. 讨论  87-89
      4.1 单体包被半胱胺对肥育猪生产性能的影响  87
      4.2 半胱胺对肥育猪GH-IGF轴系统的影响  87-89
    5. 小结  89-90
第三部分 本研究的总体讨论  90-93
第四部分 全文总结、创新点和今后研究展望  93-95
  一、全文总结  93-94
  二、本研究的主要创新点  94
  三、今后需进一步研究的问题  94-95
参考文献  95-105
致谢  105-106
攻读博士学位期间发表论文  106

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 普通畜牧学 > 饲料
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