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复方促排铅功能制剂的组分优化及其生物活性研究

作　者: 张东杰
导　师: 马中苏
学　校: 吉林大学
专　业: 农业生物环境与能源工程
关键词: 基因工程菌 大豆抗氧化肽 分离纯化 促排铅 模糊评价 组分优化 生物活性
分类号: TQ460
类　型: 博士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


本课题是国家“十五”食品安全重大科技专项——《食品安全关键技术应用的综合示范》的子课题暨黑龙江省科技攻关重点项目——《食品驱铅关键技术对铅中毒改善的研究与应用》(编号:GB04C109-01)、大庆科技局课题——《基于CAC标准的大豆分离蛋白含量、氮溶指数等优化工艺及中试研究》(编号:SGG2008-037)和大庆高新开发区创新基金——《大豆抗氧化肽提纯工艺的优化及在促排铅功能制剂中协同效果的研究》(编号:DQGX08YF027)的部分研究内容。本文主要针对复方促排铅功能制剂的组分优化及其生物学活性展开研究。首先,对促排铅作用机理进行阐述,并对国内外促排铅药物和保健品现状进行对比分析;通过对高产蛋白酶的枯草芽孢杆菌基因工程菌的构建,对具有协同促排铅功效的大豆抗氧化肽进行了制备、分离和纯化的研究;再对药食同源的天然原料进行了单因素机器最佳剂量的筛选;利用数学统计方法创建了优化的数学模型,确立了复方促排铅功能制剂的优化组方,模糊数学评价其功效性;在此基础上,动物试验验证了该功能制剂促排铅的有效性和补充微量元素的可行性;最后结合对试验动物机体抗氧化损伤及修复的试验,综合体现和证实了该复方促排铅功能制剂的功效。

全文目录


提要  5-9
第1章 绪论  9-34
  1.1 研究的背景和意义  9-11
    1.1.1 研究的背景  9-10
    1.1.2 研究的意义  10-11
  1.2 文献综述  11-32
    1.2.1 制备和纯化大豆抗氧化肽方法的研究进展  11-21
    1.2.2 不同物质的促排铅机理及驱铅治疗的研究进展  21-32
  1.3 研究的主要内容  32-34
第2章 协同促排铅大豆活性肽制备中的枯草芽孢杆菌产蛋白酶APR 基因的克隆和表达  34-45
  2.1 材料与仪器  34-35
    2.1.1 菌株和载体  34
    2.1.2 试剂及仪器  34-35
    2.1.3 引物  35
  2.2 试验方法  35-39
    2.2.1 枯草芽孢杆菌总DNA 的提取  35-36
    2.2.2 PCR 扩增特异性基因  36
    2.2.3 PCR 产物的纯化回收  36-37
    2.2.4 连接和转化  37
    2.2.5 质粒DNA 的提取  37
    2.2.6 重组质粒pGM-T/ apr 的KpnI 和BamHI 双酶切鉴定  37-38
    2.2.7 原核表达质粒pET-22b（+）-apr 的构建和鉴定  38
    2.2.8 原核表达质粒PET-22b（+）-apr 的诱导表达  38-39
    2.2.9 蛋白的酶活测定  39
  2.3 结果与分析  39-42
    2.3.1 Bacillus subtilis 总DNA 的提取鉴定  39
    2.3.2 目的基因的鉴定  39
    2.3.3 重组质粒的鉴定  39-41
    2.3.4 重组质粒pGM-T/apr 测序结果  41
    2.3.5 表达质粒的构建与鉴定  41-42
    2.3.6 表达质粒的诱导表达及表达形式鉴定  42
  2.5 表达产物的酶活性测定  42-43
  2.4 讨论  43-44
  2.5 本章小结  44-45
第3章 凝胶过滤色谱分离大豆抗氧化肽  45-56
  3.1 材料与仪器  45-46
    3.1.1 试验材料  45
    3.1.2 试验设备  45-46
  3.2 试验方法  46-48
    3.2.1 大豆肽的的分离  46
    3.2.2 凝胶层析条件的确定  46
    3.2.3 各组份大豆肽相对分子量的测定  46-47
    3.2.4 抗氧化活性测定  47-48
    3.2.5 大豆抗氧化活性肽的氨基酸组成分析  48
    3.2.6 大豆抗氧化活性肽的高效液相色谱(RP-HPLC)分析  48
  3.3 结果与分析  48-53
    3.3.1 大豆肽的分离  48-49
    3.3.2 分子量标准曲线的绘制  49-50
    3.3.3 分子量范围的确定  50
    3.3.4 抗氧化活性的研究  50-53
  3.4 讨论  53-55
  3.5 本章小结  55-56
第4章 筛选螯合铅效果较佳的功能因子配方和剂量的试验  56-61
  4.1 材料与仪器  56
    4.1.1 试验材料  56
    4.1.2 试验仪器  56
  4.2 试验方法  56-57
    4.2.1 人体胃环境模拟设计方案  56-57
    4.2.2 模拟的人体胃环境中铅离子的螯合吸附  57
    4.2.3 筛选功能因子的较佳配比  57
    4.2.4 筛选功效因子的单因素剂量的试验  57
    4.2.5 数据处理方法  57
  4.3 结果与分析  57-59
    4.3.1 功效因子的较佳配比分布表  57-58
    4.3.2 功效因子单因素不同剂量的螯合效果  58-59
  4.4 讨论  59-60
  4.5 本章小结  60-61
第5章 五元二次旋转回归试验优化螯合铅的组合及其数学模型的多种评价分析方法  61-77
  5.1 材料与仪器  61-62
    5.1.1 试验材料  61-62
    5.1.2 试验仪器  62
  5.2 试验方法  62-63
    5.2.1 人体胃环境模拟设计方案  62
    5.2.2 模拟的人体胃环境中铅离子的螯合吸附  62
    5.2.3 优化功能因子的螯合条件  62
    5.2.4 数据处理方法  62
    5.2.5 功能制剂配方的优化设计研究与评价  62-63
    5.2.6 采用模糊评价的方法分析评价功能制剂的排铅效果  63
  5.3 结果与分析  63-73
    5.3.1 五元二次旋转回归方程的建立  63-64
    5.3.2 五元二次旋转回归方程的检验和优化  64-67
    5.3.3 五元二次旋转回归方程最佳因素水平组合的确定  67
    5.3.4 交互效应分析  67-69
    5.3.5 各因素对结果贡献率分析  69-70
    5.3.6 单因素效应分析  70-72
    5.3.7 口服液的经济性分析  72-73
  5.4 复方功能制剂效果的模糊评价  73-75
    5.4.1 确定评价因素集和评判集  73-74
    5.4.2 确定因素评判矩阵  74-75
    5.4.3 确定Xi 各子因素的权重  75
    5.4.4 对各因素Xi 的一级评价  75
    5.4.5 第二级综合评判  75
  5.5 讨论  75-76
  5.6 本章小结  76-77
第6章 促排铅功能制剂的驱铅效果  77-86
  6.1 材料和仪器  77-78
    6.1.1 材料和仪器  77
    6.1.2 试验动物  77-78
  6.2 试验方法  78-79
    6.2.1 喂饲方法和动物模型建立  78
    6.2.2 毒理学安全试验  78
    6.2.3 检测指标的测定和方法  78
    6.2.4 数据的统计学分析  78-79
  6.3 结果与分析  79-84
    6.3.1 毒理学安全试验结果  79
    6.3.2 复方促排铅功能制剂20d 对小鼠全血中矿物元素铅、钙和锌的影响  79-80
    6.3.3 复方促排铅功能制剂40d 对小鼠全血中矿物元素铅、钙和锌的影响  80
    6.3.4 复方促排铅功能制剂对小鼠肝脏中矿物元素铅、钙和锌的影响  80-82
    6.3.5 复方促排铅功能制剂对小鼠骨中矿物元素铅、钙和锌的影响  82-84
  6.4 讨论  84-85
  6.5 本章小结  85-86
第7章 复方促排铅功能制剂对高脂模型小鼠抗氧化作用的研究  86-92
  7.1 材料与仪器  86
    7.1.1 试验材料  86
    7.1.2 试验仪器  86
  7.2 试验方法  86-88
    7.2.1 试验动物模型的建立和喂饲方法  86-87
    7.2.2 抗氧化指标的测定和方法  87
    7.2.3 数据的统计学分析  87-88
  7.3 结果与分析  88-90
    7.3.1 复方促排铅功能制剂对小鼠血浆和肝脏组织中丙二醛（MDA）水平的影响  88
    7.3.2 复方促排铅功能制剂对小鼠全血中SOD 和GSH-PX 水平的影响  88-90
  7.4 讨论  90-91
  7.5 本章小结  91-92
第8章 研究结论及展望  92-95
  8.1 研究结论  92-93
    8.1.1 论文研究的主要结论  92-93
    8.1.2 论文研究的创新点  93
  8.2 研究展望  93-95
参考文献  95-105
攻读博士期间发表的学术论文及取得的学术成果  105-107
致谢  107-108
摘要  108-110
ABSTRACT  110-111

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中图分类: > 工业技术 > 化学工业 > 制药化学工业 > 一般性问题
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