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PreS-Tat真核表达载体的构建及表达

作　者: 张祥
导　师: 阚全程
学　校: 郑州大学
专　业: 药理学
关键词: 乙肝病毒蛋白转导域 PreS 融合蛋白
分类号: R373
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 15次
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内容摘要

背景和目的乙型肝炎病毒(HBV)感染已经成为严重威胁全人类健康的主要问题之一据估计,全球大约有3.5亿HBV携带者,每年约有100万人死于由于乙肝病毒感染所致的肝细胞癌、肝硬化、肝衰竭等相关疾病。我国是HBV感染严重的地区,据不完全统计,我国的慢性无症状HBV携带者(AsC)可能超过1.3亿人,约占全球HBV病毒携带者的1/3,基本占我国人口总数的10%。HBV病毒感染与发病率在国内一直位于前列。HBV结构独特,是目前已知的感染人类最小的DNA病毒。它由两条长度不同的链组成一个小双环的双链DNA。HBV复制率高,具有很强的适应性与变异性。HBV复制有逆转录的过程,而参与逆转录的DNA聚合酶缺乏校对作用,因此,HBVDNA容易产生不可修复的变异。病毒的变异为疾病的预防、诊断、治疗等带来困难与挑战。体内HBV感染缺乏自发性的病毒清除机制,目前最有效的方法是采用抗病毒药物进行抗病毒治疗,然而由于作用靶点的限制等因素,没有一种药物能够完全清除体内的HBV。慢性肝炎逐渐按照炎症坏死、纤维化和肝硬化的程序发展,最终又发展为肝衰竭和肝细胞癌,为家庭与社会带来了沉重的负担。寻找新的治疗乙肝的药物是目前研究的一个热点。本实验通过构建pEGFP-PreS-Tat嵌合载体并在Hela细胞中表达,为下一步研究该蛋白肝细胞特异性靶向药物的研究打下基础。方法通过基因克隆技术从临床上确诊的乙肝病毒感染阳性的患者的血清中扩增出PreS序列,然后定向克隆入pEGFP-C3载体,将人工合成的Tat序列连接到PreS序列下游,构建pEGFP-Pres-Tat嵌合载体。连接成功后的载体转染感受态细胞,采用Western Blot法检测表达的蛋白。结果经过双酶切及测序,构建成功pEGFP-PreS-Tat嵌合载体,Western Blot检测到该载体能够表达相应的蛋白。结论成功的构建了pEGFP-PreS-Tat嵌合载体,为下一步研究该融合蛋白的靶向性药物打下了基础。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-9
前言  9-10
材料与方法  10-23
结果  23-24
讨论  24-26
结论  26-27
参考文献  27-29
附图  29-33
论文综述  33-60
  参考文献  55-60
英文缩略词表  60-61
个人简历及在校期间发表论文  61-62
致谢  62

PreS-Tat真核表达载体的构建及表达

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