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兔骨髓间充质干细胞体外向心肌样细胞诱导分化后在房室传导阻滞模型中的治疗探索

作　者: 卢炯斌
导　师: 邱汉婴
学　校: 汕头大学
专　业: 内科学
关键词: 骨髓间质干细胞诱导分化房室传导阻滞移植治疗
分类号: R541.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

研究目的及背景目前临床上针对二度Ⅱ型或者三度房室传导阻滞,一般采用永久性起搏器植入术进行治疗;但是起搏器毕竟是个异物,而且电池需要更换,给患者带来很大的不便,是否有更好的办法治疗传导阻滞呢?既往有学者通过移植骨髓间质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)对房室传导阻滞进行治疗,并取得一定的效果。BMSCs作为骨髓微环境里一种具有多分化功能的细胞,能被诱导分化为神经元细胞、脂肪细胞、成骨细胞、心肌细胞、肝细胞等多种细胞。近来实验证明,BMSCs在体外经过5-氮胞苷(5-azacytidine 5-aza)的诱导向心肌样细胞分化的同时,其细胞膜表面的缝隙连接蛋白43(Connexin43 Cx43)表达量也会大量表达,并与心肌细胞形成间隙连接通讯(Gap junction intercellular communication GJIC)起到心脏起搏传导的作用。本研究利用诱导后BMSCs的这个特点,移植自体心肌样细胞到兔房室传导阻滞模型的房室结区中,通过体表心电图检测,探索其对房室传导阻滞的治疗效果。材料与方法以新西兰大白兔为研究对象,采用不连续Percoll分离液密度梯度离心法,从兔骨髓中分离、培养BMSCs,BMSCs经体外原代培养扩增至第四代细胞经5-氮胞苷(5-azacytidine 5-aza)诱导分化为心肌样细胞。倒置显微镜观察5-aza的诱导分化后心肌细胞的形态变化。实验兔子行右侧开胸手术,取主动脉根部和右心房壁之间的心外膜脂肪垫作为进针点,平行于主动脉升部进针约5-8mm后注射70%的酒精150μL,建立兔房室传导阻滞模型。术后10d行兔体表心电图检测,仍存在房室传导阻滞模型大白兔予再次开胸,细胞移植治疗组取经5-aza诱导4周后并经4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(dihydrochloride DAPI)标记的BMSCs移植于房室结区;对照组不予任何处理;培养液治疗组予注射培养液治疗;细胞移植组予移植自体诱导后BMSCs进行治疗。治疗组及对照组大白兔治疗后,每隔2d行体表心电图检测,记录其心电变化情况一直到治疗后14d,观察治疗前后体表心电图的变化情况。采用免疫荧光技术观察移植区的BMSCs存活及分布特点。结果1.开胸直视下,通过注射70%酒精于大白兔房室结区能成功构建稳定房室传导阻滞的模型。2.治疗2周后,通过体表心电图检测发现,对照组中大白兔的房室传导阻滞不能自行改善(p>0.05);培养液治疗组大白兔房室传导阻滞无明显变化(p>0.05);而细胞移植治疗组中部分大白兔的房室传导阻滞可见明显好转(p<0.05)。3.通过快速冰冻切片于荧光电镜下可知,细胞移植治疗组中,诱导后的BMSCs能够在移植部位生长;但是细胞为无规律的生长,缺乏一致的生长方向和排列顺序。结论1.通过注射70%酒精于大白兔房室结区能成功构建房室传导阻滞的模型。2.自体骨髓间充质干细胞体外诱导分化未心肌样细胞后对房室传导阻滞有一定的治疗效果。3.自体诱导后的BMSCs能在房室结区较好的生长。

全文目录

中文摘要  3-5
英文摘要  5-7
缩略语表  7-9
第一章前言  9-12
第二章材料和方法  12-18
第三章结果  18-28
第四章讨论  28-31
第五章结论与展望  31-32
第六章参考文献  32-37
综述  37-44
  参考文献  41-44
致谢  44-45
发表论文情况  45-46
个人简历  46

兔骨髓间充质干细胞体外向心肌样细胞诱导分化后在房室传导阻滞模型中的治疗探索

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