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大鼠脑缺血模型评价及大鼠脑缺血慢性期GFAP、NSE、SYN、Nogo-A表达与神经功能转归的相关性

作　者: 刘世民
导　师: 张昆南
学　校: 南昌大学
专　业: 神经病学
关键词: 大鼠 大脑中动脉缺血再灌注 免疫组化 mNSS GFAP NSE SYN Nogo-A
分类号: R741
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


第一部分大鼠脑缺血不同时间神经功能及梗死面积比较目的：探讨Longa线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注(modified neurological severity scores, MCAO)模型梗死部位及造成的神经功能缺损的稳定性；探讨线栓法制模时缺血不同时间再灌注对大鼠神经功能及梗死面积的影响,以期明确线栓法制备MCAO模型的可靠性及最佳缺血时间,为进一步实验提供依据。方法：22只SD大鼠随机分为1h (n=6)、2h (n=6)、4h (n=6)及6h(n=4)组,参照Longa线栓法制备MCAO模型,分别在缺血1h、2h、4h和6h再灌注,在制模后1d、3d、5d、7d对大鼠进行改良神经功能缺损评分(modified neurological severity scores, mNSS),7d后处死大鼠,取脑进行TTC染色计算梗死面积。结果：MCAO后大鼠神经功能缺损明显,其中MCAO后Id mNSS评分1h、2h、4h及6h组分别为6.33±0.82、9.83±1.17、10.83±1.17、12.00±0.81,其中除2h与4h组、4h与6h组差异无统计学意义(P>0.05),其他组间均有统计学差异(P<0.05)；制模后大鼠7d成活率分别为66.7%(6/9)、46.2%(6/13)、35.3%(6/17)、16.0%(4/25),其中1h组、2h组与6h组成活率差异具有统计学意义(P<0.05),其余各组间差异无统计学意义(P>0.05)。梗死面积百分比四组分别为(0.1139±0.0122)%、(0.2279±0.0309)%、(0.2509±0.0229)%、(0.2839±0.0220)%。1h组主要的梗死部位为皮质,2h、4h、6h组主要梗死部位为皮质及基底节区。除2h组和4h组显著小于6h组(P<0.05)外,其余组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论：1.采用Longa线栓法制备脑缺血模型最佳的缺血再灌注时间为2h；2.采用Longa线栓法制备大鼠脑缺血模型简单稳定,可控性、可重复性好。第二部分大鼠MCAO后慢性期GFAP、NSE、SYN、Nogo-A表达与神经功能转归的相关性目的：探讨大鼠大脑中动脉缺血再灌注恢复期神经功能恢复与胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase, NSE)、突触素(synaptophysin, SYN)、轴索过度生长抑制因子(Neurite outgrowth inhibitor -A, Nogo-A)表达的关系。方法：24只SD大鼠随机分为28d、35d、42d及49d组,采用Longa线栓法缺血2h再灌注制备脑缺血模型,分别在28d、35d、42d、49d对大鼠进行改良神经功能缺损评分(modified neurological severity scores, mNSS),以及应用免疫组化观察脑组织GFAP、NSE、SYN、Nogo-A表达。结果：大鼠MCAO再灌注后随着时间推移,mNSS评分逐渐下降,除了35d组(5.11±0.737)和42d组(4.54±0.519),42d组和49d组(4.29±0.488)无限制差异外,其余各组间均有统计学意义(P均<0.05)。GFAP阳性细胞数量从28d组至49d组逐渐减少,其中42d组(51.00±13.59)和49d组(44.38±11.94)显著少于28d组(69.00±15.10)(P<0.05)；虽然NSE阳性细胞数量各组间差异无统计学意义,但NSE累计光密度(integrated optical density, IOD)逐渐增高,28d组(6218.57±1864.25)和42d组(9414.00±2491.12)、49d组(12522.50±3106.99),35d组(7343.40±1533.35)和49d组差异显著(P<0.05),其余各组间无显著差异(P>0.05); SYN表达IOD逐渐增高,49d组(66503.00±12834.61)显著高于28d组(43905.14±13208.59)(P<0.05), Nogo-A阳性细胞数量逐渐减少,49d组(42.13±14.45)显著少于28d组(59.57±15.25)(P<0.05)。GFAP表达与mNSS评分呈正相关(r=-0.992, P=0.008), NSE (i=-0.954, P=0.044)、SYN (r=-0.992,P=0.008)表达与mNSS评分呈负相关。结论：1.大鼠MCAO再灌注后恢复期神经功能的恢复与GFAP表达下降、NSE和SYN表达升高相关；2.反应性星型胶质细胞增生在脑梗死中的作用可能因所处疾病阶段不同而不一。

全文目录


摘要  3-5
ABSTRACT  5-10
主要符号和缩略语说明  10-11
前言  11-13
第一部分: 大鼠脑缺血不同时间神经功能及梗死面积比较  13-25
  1.1 材料与方法  13-16
    1.1.1 实验动物及分组  13
    1.1.2 试剂  13
    1.1.3 仪器  13
    1.1.4 手术材料及器械  13-14
    1.1.5 MCAO模型制作步骤  14-15
    1.1.6 MCAO功能评分  15-16
    1.1.7 TTC染色  16
  1.2 统计分析  16-17
  1.3 结果  17-19
    1.3.1 MCAO造模成功后大鼠的典型表现  17
    1.3.2 mNSS评分  17-18
    1.3.3 术后成活率  18-19
    1.3.4 梗死面积比较  19
  1.4 讨论  19-22
    1.4.1 实验动物的选择  20
    1.4.2 缺血模型的选择  20-21
    1.4.3 缺血时间的选择  21
    1.4.4 制备MCAO模型大鼠的经验和体会  21-22
  1.5 结论  22-23
  第一部分附图  23-25
第二部分: MCAO后慢性期GFAP、NSE、SYN、NOGO-A表达与神经功能转归的相关性  25-36
  2.1 材料与方法  25-28
    2.1.1 实验动物及分组  25
    2.1.2 试剂  25
    2.1.3 仪器  25-26
    2.1.4 主要的器械  26
    2.1.5 MCAO模型的制作  26
    2.1.6 行为测试(mNSS评分)  26
    2.1.7 脑组织固定  26-27
    2.1.8 免疫组化染色  27-28
  2.2 取图  28-29
  2.3 统计学分析  29
  2.4 结果  29-33
    2.4.1 mNSS评分  29-30
    2.4.2 免疫组化  30-32
    2.4.3 相关性分析结果  32-33
  2.5 讨论  33-35
  2.6 结论  35-36
实验存在的不足与展望  36-37
致谢  37-38
参考文献  38-42
附图  42-45
攻读学位期间发表的论文  45-46
综述  46-52
  参考文献  51-52

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中图分类: > 医药、卫生 > 神经病学与精神病学 > 神经病学
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