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钩藤总碱抑制高血压血管外膜重构的机制研究

作　者: 刘倩
导　师: 滕佳林
学　校: 山东中医药大学
专　业: 中药学
关键词: 钩藤总碱高血压血管外膜重构血管外膜成纤维细胞增殖
分类号: R285.5
类　型: 博士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:探讨钩藤总碱抑制高血压血管外膜重构的机制。方法:以培养Wistar大鼠血管成纤维细胞为研究平台,通过血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）体外干预血管外膜成纤维细胞建立高血压外膜重构模型;观察钩藤总碱的细胞毒性,从而选用合适的实验药物浓度（MTT）;利用电子显微镜更加直观的反映钩藤总碱对血管紧张素Ⅱ诱导增殖的成纤维细胞形态的影响;通过与卡托普利组和AngⅡ诱导增殖模型组比较,利用流式细胞仪,研究钩藤总碱对血管成纤维细胞细胞周期的影响;采用RT-PCR法检测血管外膜成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达,从基因表达水平研究钩藤总碱对血管成纤维细胞中胶原合成的调节作用;综合分析钩藤总碱对高血压血管外膜重构的影响。结果:本实验利用AngⅡ体外干预血管外膜成纤维细胞建立高血压外膜重构模型是成立的;AngⅡ体外干预血管成纤维细胞建立高血压外膜重构模型的最适浓度2×10-7mol/L;卡托普利的药物干预剂量是400ug/ml;钩藤总碱的药物干预剂量是200ug/ml和400ug/ml;电镜下观察钩藤总碱对血管成纤维细胞的增殖有抑制作用,400 ug/ml钩藤总碱干预下的血管成纤维细胞有细胞凋亡的表现;细胞周期的结果提示钩藤总碱对AngⅡ的促VAF增殖效应的抑制作用是通过增加G₀ /G₁期细胞百分含量,减少S期细胞的百分含量,阻断细胞由G₀ /G₁期向S期转化而实现的,并且这种抑制作用与卡托普利比较无明显差异;钩藤总碱可抑制AngⅡ刺激的血管外膜成纤维细胞的Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达;对Ⅰ型胶原mRNA的表达呈剂量依赖性,与卡托普利相比其抑制关系为400ug/ml钩藤总碱>卡托普利,卡托普利和200ug/ml钩藤总碱无明显差异。三组干预药物对Ⅲ型胶原mRNA的表达的抑制作用无明显差异。结论:钩藤总碱抑制高血压外膜重构的机制有两方面。一方面,钩藤总碱可以抑制血管紧张素Ⅱ诱导的血管外膜成纤维细胞的增殖,其抑制血管外膜成纤维细胞增殖的途径是通过增加G₀ /G₁期细胞百分含量,减少S期细胞的百分含量,阻断细胞由G₀ /G₁期向S期转化而实现的;另一方面钩藤总碱能够减少血管外膜Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成,其途径是通过下调血管外膜成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达实现的。

全文目录

提要  3-4
Abstract  4-9
引言  9-10
第一部分钩藤的药用沿革  10-16
  一、钩藤入药的历史沿革  10-12
  二、钩藤平肝以治眩  12-14
  三、钩藤对高血压病治疗的现代研究  14-16
第二部分钩藤总碱抑制高血压血管外膜重构的实验研究  16-43
  实验一血管外膜成纤维细胞的原代培养及鉴定  16-21
    一、实验材料  16-17
      （一）实验动物  16
      （二）实验试剂  16
      （三）实验试剂的配制  16-17
      （四）实验仪器  17
    二、实验方法  17-20
      （一）原代细胞培养  17-18
      （二）传代培养  18-19
      （三） VAF 鉴定  19-20
    三、实验结果  20-21
      （一）形态学观察  20
      （二）免疫细胞化学染色鉴定  20-21
  实验二 MTT 比色法观察钩藤总碱对血管成纤维细胞增殖的影响  21-29
    一、实验材料  21-22
      （一）实验细胞  21
      （二）实验试剂  21
      （三）实验药物  21-22
      （四）实验仪器  22
    二、实验方法  22-25
      （一） MTT 比色法筛选实验药物剂量  22-24
      （二） MTT 法观察钩藤总碱对血管成纤维细胞增殖的影响  24-25
    三、数据统计方法  25-26
    四、实验结果  26-29
      （一）实验用药药物剂量的筛选结果  26-27
      （二） MTT 法观察钩藤总碱对血管成纤维细胞增殖的影响  27-29
  实验三镜下观察钩藤总碱对血管紧张素Ⅱ诱导增殖的成纤维细胞形态的影响  29-32
    一、实验材料  29-30
      （一）实验细胞  29
      （二）实验试剂  29
      （三）实验药物  29
      （四）实验仪器  29-30
    二、实验方法  30-31
    三、实验结果  31-32
  实验四钩藤总碱对AngⅡ诱导增殖的VAF 细胞周期的影响  32-36
    一、实验材料  32-33
      （一）实验细胞  32
      （二）实验试剂  32
      （三）实验药物  32
      （四）实验仪器  32-33
    二、实验方法  33-34
    三、数据统计方法  34
    四、实验结果  34-36
  实验五钩藤总碱对AngⅡ诱导增殖的血管成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA 表达的影响  36-43
    一、实验材料  36-38
      （一）实验细胞  36
      （二）实验试剂  36
      （三）实验药物  36
      （四）实验仪器  36-37
      （五）实验前准备事项  37-38
    二、实验方法  38-41
    三、数据统计方法  41
    四、实验结果  41-43
讨论  43-57
  一、血管外膜在高血压血管重构中的作用  43-44
  二、外膜成纤维细胞在高血压血管重构中的作用  44-46
  三、利用血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）体外干预血管外膜成纤维细胞（VAF）建立高血压外膜重构模型的评价  46-49
  四、钩藤总碱对血管成纤维细胞增殖的影响  49-51
  五、电镜下观察钩藤总碱对AngⅡ诱导增殖的VAF 形态的影响  51-53
  六、钩藤总碱对AngⅡ诱导增殖的VAF 细胞周期的影响  53-55
  七、钩藤总碱对AngⅡ诱导增殖的VAFⅠ、Ⅲ型胶原mRNA 表达的影响  55-57
结语  57-59
参考文献  59-63
综述  63-75
   参考文献  72-75
附录  75-83
致谢  83-84
查新报告  84-93
发表论文  93-104
详细摘要  104-110

钩藤总碱抑制高血压血管外膜重构的机制研究

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