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钩藤总碱抗高血压血管重塑、抑制血管平滑肌细胞增殖的研究

作　者: 岳桂华
导　师: 丁书文
学　校: 山东中医药大学
专　业: 中医内科学
关键词: 钩藤总碱高血压血管重塑血管平滑肌细胞增殖
分类号: R259
类　型: 博士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

目的:钩藤总碱抗高血压血管重塑、抑制血管平滑肌细胞增殖的作用及其机制。方法:①在体实验观察钩藤提取物钩藤总碱对SHR尾动脉血压的影响,观察三级动脉血管光镜和体视学变化,检测SHR胸主动脉血管紧张素Ⅱ,胸主动脉平滑肌细胞内Ca²⁺变化,以研究钩藤总碱的降压、改善血管重塑及可能的机制②建立培养以血管紧张素Ⅱ诱导增殖的VSMC模型。检测指标及方法:MTT反映细胞DNA合成水平,平滑肌细胞生长曲线观察钩藤总碱对细胞生长的抑制作用,流式细胞仪观察VSMC周期、培养细胞内钙的浓度、c-myc基因表达。结果:钩藤总碱可以降低SHR尾动脉血压,与模型组相比有非常明显差异（P﹤0.01）,模型组大鼠胸主动脉、肾动脉和肠系膜动脉的管壁内膜、中膜和外膜均存在不同程度的增厚现象;胸主动脉、肾动脉和肠系膜动脉中膜厚度/管腔直径的比值明显升高,与正常对照组相比存在非常显著的差异（P﹤0.01）。与模型组比较,钩藤总碱组大鼠胸主动脉、肾动脉和肠系膜动脉中膜厚度/管腔直径的比值均明显降低（P﹤0.05）。同时钩藤总碱降低了SHR血管AngⅡ及平滑肌细胞内Ca²⁺含量,与模型组有显著差异及非常显著性差异（P﹤0.05、P﹤0.01）。离体培养VSMC AngⅡ诱导增殖组具有明显促进VSMC增殖作用;药物组在12h、24h均可抑制VSMC增殖,与模型组比较差异有显著性、非常显著性（P<0.05、P﹤0.01）。各组进行了VSMC生长曲线的描记,经含药物的培养基干预后,细胞生长曲线下移,钩藤总碱组抑制作用较卡托普利组明显。细胞周期研究发现钩藤总碱组与诱导增殖组相比,G1期增高（P﹤0.05）, S期明显降低（P﹤0.01）,可见钩藤总碱可以阻断细胞由G0/G1期向DNA合成的S期转化,从而抑制培养VSMC增殖的作用。与AngⅡ诱导增殖组相比,钩藤总碱组VSMC Ca²⁺表达水平显著降低（P<0.01）,与AngⅡ诱导增殖组相比,钩藤总碱组VSMCc-myc蛋白表达水平显著降低（P<0.01）,说明钩藤总碱抑制VSMC增殖的作用可能与降低细胞内钙水平及调控病理状态下c-myc基因过度表达有关。结论:钩藤总碱具有降压和改善血管重塑作用,其降压机制与降低血管局局部AngⅡ和VSMC Ca²⁺有关;改善血管重塑可能与降压和抑制VSMC增殖有关;抑制VSMC增殖的作用与其降低细胞内钙水平及调控病理状态下c-myc基因过度表达有关。

全文目录

提要  3-5
Abstract  5-10
引言  10-11
第一部分高血压治疗现状  11-20
  1 高血压的发病—一个沉重的话题  11-12
  2 高血压的治疗—成就与不足  12-15
    2.1 西医对高血压的认识  12-13
    2.2 当前治疗高血压的药物小结  13-14
    2.3 控制高血压—任重道远  14-15
  3 中医治疗高血压的进展与挑战  15-18
    3.1 中医对高血压病因病机的认识  15
    3.2 中药对高血压的治疗  15-16
    3.3 中药对高血压病治疗的思考  16-17
    3.4 中药提取物改善高血压的血管重塑—积极的探索  17-18
  4 钩藤心血管药理研究  18-20
第二部分在体、离体动物实验研究  20-39
  实验一钩藤总碱对SHR 降压及血管重塑影响的在体研究  20-25
    1 实验材料  20-21
      1.1 实验动物  20
      1.2 饲养条件  20
      1.3 实验药品  20
      1.4 实验仪器  20-21
      1.5 主要试剂  21
    2 实验方法  21-22
      2.1 分组方法  21
      2.2 给药方法  21-22
    3 取材及检测方法  22-23
      3.1 尾动脉收缩压的测量方法  22
      3.2 动脉的留取  22
      3.3 胸主动脉、肾动脉和肠系膜动脉组织学观测  22
      3.4 胸主动脉、肾动脉和肠系膜动脉体视学观测  22
      3.5 各组胸主动脉血管紧张素Ⅱ含量的检测  22
      3.6 胸主动脉平滑肌细胞Ca~(2+)检测  22-23
    4 统计学分析方法  23
    5 实验结果  23-25
      5.1 对各组SHR 尾动脉收缩压的影响  23-24
      5.2 胸主动脉、肾动脉和肠系膜动脉病理组织学观测  24
      5.3 胸主动脉、肾动脉和肠系膜动脉体视学观测  24
      5.4 各组SHR 胸主动脉血管紧张素Ⅱ的浓度变化  24-25
      5.5 各组SHR 胸主动脉平滑肌细胞Ca2+变化  25
  实验二钩藤总碱对Wistar 大鼠血管平滑肌细胞增殖影响的研究  25-39
    1 实验材料  25-29
      1.1 实验动物  25-26
      1.2 实验药品  26
      1.3 主要仪器  26-27
      1.4 主要试剂  27-28
      1.5 部分试剂配制  28-29
    2 实验方法  29-34
      2.1 大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞原代,传代培养及免疫组化鉴定  29-30
      2.2 MTT 比色实验筛选药物合适剂量  30
      2.3 MTT 法观察钩藤总碱对血管平滑肌细胞增值的影响  30-31
      2.4 各组血管平滑肌细胞生长曲线的描记  31
      2.5 钩藤总碱对血管平滑肌细胞生长周期的影响  31-32
      2.6 钩藤总碱对血管平滑肌细胞内钙离子浓度的影响  32-33
      2.7 钩藤总碱对血管平滑肌细胞c-myc 蛋白表达的影响  33-34
      2.8 统计学分析方法  34
    3 实验结果  34-39
      3.1 培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞鉴定结果  34
      3.2 实验用药药物剂量的筛选结果  34-35
      3.3 钩藤总碱MTT 法对血管平滑肌增值的影响的结果  35-36
      3.4 各组血管平滑肌细胞生长曲线的描记结果  36
      3.5 钩藤总碱对血管平滑肌细胞生长周期影响的结果  36-37
      3.6 钩藤总碱对血管平滑肌细胞Ca2+影响的结果  37-38
      3.7 钩藤总碱对血管平滑肌细胞c-myc 蛋白表达影响的结果  38-39
第三部分讨论  39-57
  1 高血压病与血管重塑  39-44
    1.1 高血压血管重塑的含义  39-40
    1.2 高血压血管重塑的类型  40-41
    1.3 高血压血管重塑的原因  41-44
  2 血管重塑与VSMC 的增殖、凋亡  44-46
    2.1 VSMC 的增殖与高血压血管重塑  44-45
    2.2 VSMC 的凋亡与高血压血管重塑  45-46
  3 高血压、VSMC 的增殖与细胞钙代谢  46-47
    3.1 高血压与细胞钙代谢  46
    3.2 VSMC 的增殖与细胞钙代谢  46-47
  4 钩藤提取物抗高血压血管重塑及VSMC 增殖的实验效应分析  47-55
    4.1 钩藤总碱对SHR 的降压分析  47-49
    4.2 钩藤总碱对SHR 抗血管重塑的效应分析  49-52
    4.3 钩藤提取物抗VSMC 增殖的实验效应分析  52-55
  5 本研究的意义、不足  55-57
结语  57-59
参考文献  59-71
综述  71-78
附录  78-86
致谢  86-87
详细摘要  87-94

钩藤总碱抗高血压血管重塑、抑制血管平滑肌细胞增殖的研究

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