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NF-κB在肿瘤相关巨噬细胞促煤焦沥青烟提取物诱导BEAS-2B恶变过程中的表达

作　者: 张少峰
导　师: 吴逸明
学　校: 郑州大学
专　业: 劳动卫生与环境卫生学
关键词: 煤焦沥青炎症肿瘤相关巨噬细胞 NF-κB
分类号: R730.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

背景流行病学资料和遗传学资料证明慢性炎症能够促进肿瘤发生发展的进程。肿瘤相关巨噬细胞(Tumor-associated macrophage, TAM)是炎症与癌症之间联系的主要调节因素。肿瘤微环境在造就TAM的同时,TAM也表现出促进肿瘤发生发展的功能。核转录因子kB(Nuclear factor-kappa B, NF-kB)是炎症和癌症之间关键的连接点之一。煤焦沥青(coal tar pitch, CTP)引发的肺癌是焦炉工人职业肿瘤中的主要组成部分。炎症在煤焦沥青这一混合物致癌过程中可能作用的机制如何,少有报道,需要进一步研究。研究利用中温煤焦沥青烟提取物(Coal tar pitch smoke extract, CTP)诱导永生化人支气管上皮细胞(Human Bronchial Epithelial Cells, BEAS-2B)恶性转化,建立BEAS-2B细胞与人单核细胞系THP-1细胞共培养模型,观察BEAS-2B细胞在恶性转化过程中的恶性变指标,以期在体外实验中探索肿瘤相关巨噬细胞在肺癌发生过程中可能发挥的作用,之后通过研究染毒细胞NF-kB基因及蛋白的改变,探讨煤焦沥青致细胞癌变过程中NF-kB的作用,以期为肺癌提供早期诊断的生物标识及预防煤焦沥青导致的职业性肺癌提供理论基础。方法以BEAS-2B细胞为研究对象,设立煤焦沥青烟提取物染毒(煤焦沥青,CTP)组、苯并(a)芘(B(a)P)组、二甲基亚砜(DMSO)对照组、BEAS-2B与THP-1细胞共同培养组,建立癌变模型,应用软琼脂集落形成实验、染色体数目畸变分析、流式细胞仪测定细胞周期分析细胞的恶变情况,采用RT-PCR检测NF-Kb p65 mRNA的表达变化,Western Blot检测NF-kB p65蛋白表达。结果1.细胞周期测定：细胞周期测定显示10代、20代、30代细胞煤焦沥青提取物染毒组、苯并(a)芘组、共培养组较DMSO组细胞G1期细胞减少,S期细胞增加,表明染毒的3组细胞生长有加速倾向。20代时共培养组细胞S期细胞多于煤焦沥青提取物染毒组(P=0.001)和苯并(a)芘组(P=0.001),差异有统计学意义,而到30代时这3组细胞S期细胞所占比例差别更加明显。2.染色体数目畸变分析：染色体数目异常在实验的早期已经显现,表现为非整倍体和多倍体比例增加,二倍体数目减少。3.软琼脂克隆形成：10代各组细胞形成克隆数在20个以内。20代时共培养组克隆形成率高于煤焦沥青提取物染毒组和苯并(a)芘组,差异有统计学意义(P=0.001,P=0.001),煤焦沥青提取物染毒组克隆形成率与苯并(a)芘组相比较差异无统计学意义(P=0.090)。30代细胞组,苯并(a)芘组、煤焦沥青提取物染毒组克隆形成率低于共培养组,差异有统计学意义(P=0.001,P=0.001),而煤焦沥青提取物染毒组克隆形成率高于苯并(a)芘组,差异有统计学意义(P=0.032)。4. NF-kB p65基因与蛋白表达：第10代细胞即表现出暴露组NF-kB p65表达水平高于DMSO组,而暴露组之间NF-kB p65表达无差异。第20代细胞共培养组表达较煤焦沥青组、苯并(a)芘组NF-kB p65表达升高,苯并(a)芘组与煤焦沥青组相比NF-kB p65表达无差异。30代细胞中,苯并(a)芘组与煤焦沥青组NF-kB p65表达低于共培养组,煤焦沥青组NF-kB p65表达水平高于苯并(a)芘组。结论单核巨噬细胞能够加速煤焦沥青诱导的人支气管上皮细胞恶变,且NF-kB在此过程中可能起重要作用。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-9
图表索引  9-10
缩略词表  10-11
引言  11-12
材料方法  12-25
结果  25-39
  1 细胞活力计数法确定染毒剂量  25-26
  2 流式细胞仪测细胞周期  26-29
  3 染色体数目畸变分析  29-30
  4 软琼脂克隆形成实验  30-32
  5 细胞总RNA的提取结果  32-33
  6 NF-кBp65 mRNA基因表达情况  33-36
  7 细胞总蛋白的提取和浓度测定  36
  8 NF-кB p65蛋白表达情况  36-39
讨论  39-44
结论  44-45
参考文献  45-47
综述 NF-кB、TAM和癌症关系的研究进展  47-59
  参考文献  55-59
个人简历在学期间发表的学术论文与科研成果  59-60
致谢  60

NF-κB在肿瘤相关巨噬细胞促煤焦沥青烟提取物诱导BEAS-2B恶变过程中的表达

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