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BRM基因过表达对胃癌细胞系hTERT选择性剪接的影响

作　者: 王正晖
导　师: 张维铭
学　校: 天津医科大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 胃癌 Brm 逆转录酶端粒选择性剪接染色质重塑复合物SWI/SNF
分类号: R735.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的：Brm是染色质重塑复合物SWI/SNF (switch/sucrose non-fermentable)的催化亚单位,具有DNA依赖的ATP酶活性,能够通过调节染色质的结构来影响基因的表达。Brm能够影响多个基因的选择性剪接,其中人端粒酶逆转录酶(hTERT)是Brm的调控目标之一。在胃癌的演进过程中Brm和hTERT表达异常具有重要作用。本课题拟建立Brm瞬时转染的胃癌细胞模型,并研究Brm高表达对hTERT mRNA选择性剪接模式的调控作用,进一步探讨胃癌发生的分子机制。方法：用hBrm cDNA表达载体pCG-Brm-CMV转染胃癌细胞系MGC-803,应用RT-PCR和Western-blot技术分别检测转染前后细胞中Brm mRNA和蛋白的表达,选择hTERT前体mRNA的2个选择性剪接位点a和β,横跨位点设计引物,采用半巢式PCR特异性扩增4个hTERT选择性剪接变异体(ASVs) hTERT a+B+ASV, hTERT a+β-ASV, hTERT a-β+ASV, hTERT a-β-ASV,通过琼脂糖凝胶电泳检测各ASVs在转染前后胃癌细胞中的表达水平。结果：1. Brm mRNA在胃癌细胞系MGC-803中呈低水平表达,在用hBrm cDNA表达载体pCG-Brm-CMV转染后的胃癌细胞系MGC-803中表达升高。2. Brm蛋白在于转染hBrm cDNA表达载体pCG-Brm-CMV之前呈低水平表达,在转染后呈高水平表达。3. hTERT a+β+ASV在转染hBrm cDNA表达载体pCG-Brm-CMV之后的表达水平明显高于转染前。hTERT a+β-ASV在转染后不表达,在转染前表达。4.本实验未检测到hTERT a-β+ASV及hTERT a-β-ASV。结论：在胃癌细胞系MGC-803中,染色质重塑复合物SWI/SNF的催化亚单位Brm能够调节hTERT mRNA选择性剪接的模式,可以使hTERT a+β+ASV的表达升高,hTERT a+β-ASV的表达降低,从而进一步影响端粒酶的活性,本研究为阐明胃癌的分子机制提供了重要的理论依据。

全文目录

中文摘要  4-5
Abstract  5-9
缩略语  9-11
前言  11-13
  研究现状、成果  11-12
  研究目的、方法  12-13
对象和方法  13-25
  1.1 主要实验设备、仪器  13-14
  1.2 主要实验试剂  14
  1.3 标本来源  14-15
  1.4 实验步骤  15-24
    1.4.1 质粒的克隆与扩增  15-18
    1.4.2 细胞培养  18
    1.4.3 转染  18-19
    1.4.4 转染前后核酸及蛋白的提取及检测  19-22
    1.4.5 转染前后hTERT ASVs的检测  22-24
  1.5 统计学处理  24-25
结果  25-31
  2.1 质粒DNA提取及检测结果  25
  2.2 胃癌细胞系MGC-803的培养  25-26
  2.3 转染前后细胞总RNA提取结果及Brm mRNA表达  26-27
  2.4 转染前后Brm蛋白水平的检测结果  27-28
  2.5 转染前后hTERT ASVs的检测结果  28-31
讨论  31-41
  3.1 染色质重塑复合物SWI/SNF、Brm与胃癌的形成  31-34
  3.2 端粒、端粒酶、hTERT与胃癌  34-36
  3.3 brm、hTERT与选择性剪接  36-41
结论  41-42
参考文献  42-51
发表论文和参加科研情况说明  51-52
综述 mRNA选择性剪接的研究进展  52-59
  综述参考文献  57-59
致谢  59

BRM基因过表达对胃癌细胞系hTERT选择性剪接的影响

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