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养心汤含药血清对H_2O_2诱导内皮损伤模型差异基因及ST3GAL2mRNA表达的影响

作　者: 王岩
导　师: 周亚滨
学　校: 黑龙江中医药大学
专　业: 中医内科学
关键词: 养心汤 含药血清 内皮细胞 过氧化氢 ST3GAL2
分类号: R285
类　型: 博士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


目的:通过观察养心汤含药血清对过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞氧化损伤模型差异基因及ST3GAL2mRNA表达的影响,探讨其内皮保护机制,为早期防治冠心病不稳定型心绞痛提供客观依据。方法:采用过氧化氢体外诱导人脐静脉内皮细胞氧化损伤的方法,建立人脐静脉内皮细胞氧化损伤模型。实验一分为①空白血清组;②模型组;③养心汤含药血清2%组;④养心汤含药血清4%组;⑤养心汤含药血清6%组;⑥养心汤含药血清8%组。倒置显微镜下观察细胞形态、密度,MTT法测定各组细胞增殖活性。实验二分为①空白组;②模型组;③养心汤含药血清组,应用Affymetrix人基因组U133+2.0芯片观察养心汤含药血清对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞氧化损伤模型的差异基因表达的影响,并采用实时定量PCR方法对人脐静脉内皮细胞氧化损伤模型ST3GAL2mRNA的表达进行验证。结果:1.各组人脐静脉内皮细胞形态学改变:在倒置显微镜下可观察到,正常内皮细胞排列紧密,呈铺路石状。过氧化氢作用2h后,细胞变圆,开始脱落,细胞间隙增宽,密度明显降低,细胞呈梭形,细胞核折光性增强。养心汤含药血清2%、4%、6%、8%组细胞形态有所改善,轮廓相对融合。其中养心汤含药血清6%、8%组细胞变形、皱缩的程度减轻最为明显;2.与空白血清组比较,模型组细胞光密度值、增殖率均降低,其差异显著,具有统计学意义(P均<0.01)。与模型组比较,养心汤含药血清2%组细胞光密度值、增殖率均升高,差异无统计学意义(P均>0.05),养心汤含药血清4%、6%、8%组细胞光密度值、增殖率均升高,差异显著,具有统计学意义(P均<0.01)。与养心汤含药血清6%组比较,养心汤含药血清2%、4%组的细胞光密度值、增殖率均降低,差异显著,具有统计学意义(P均<0.01);养心汤含药血清8%组的细胞光密度值、增殖率均降低,差异无统计学意义(P均>0.05);3.模型组与空白组比较表达上调,养心汤含药血清组与模型组比较表达下调的基因有23个,模型组与空白组比较表达下调,养心汤含药血清组与模型组比较表达上调的基因有12个,经MAS分析后,养心汤含药血清干预人脐静脉内皮细胞氧化损伤模型差异基因的功能主要集中在与核酸结合、与蛋白激酶结合、蛋白质合成和转运、血小板活化、细胞黏附等方面;4.养心汤含药血清组ST3GAL2mRNA表达量为模型组的0.375倍,与基因芯片检测结果基本一致。结论:1.养心汤含药血清可以减轻过氧化氢对人脐静脉内皮细胞增殖的抑制作用;2.养心汤含药血清干预人脐静脉内皮细胞氧化损伤模型差异基因的功能主要集中在与核酸结合、与蛋白激酶结合、蛋白质合成和转运、血小板活化、细胞黏附等方面;3.养心汤含药血清可明显下调人脐静脉内皮细胞氧化损伤模型ST3GAL2mRNA表达水平,这可能是其保护内皮细胞损伤,防治冠心病不稳定型心绞痛的机制之一。

全文目录


缩略语表  6-8
中文摘要  8-10
ABSTRACT  10-12
前言  12-13
文献综述  13-42
  1. 祖国医学对冠心病不稳定型心绞痛的认识及研究进展  13-27
    1.1 冠心病不稳定型心绞痛的病因病机  13-17
    1.2 冠心病不稳定型心绞痛的治疗进展  17-27
  2. 现代医学对冠心病不稳定型心绞痛的认识及研究进展  27-40
    2.1 冠心病不稳定型心绞痛的危险因素  27-30
    2.2 冠心病不稳定型心绞痛的发病机制  30-35
    2.3 冠心病不稳定型心绞痛的治疗进展  35-40
  3. ST3GAL2 的研究进展  40-42
实验一. 养心汤含药血清对H_20_2诱导HUVEC 氧化损伤模型细胞增殖的影响  42-49
  材料与方法  42-47
    1 实验材料  42-43
      1.1 实验细胞  42
      1.2 实验动物  42
      1.3 实验药物  42
      1.4 主要试剂  42
      1.5 主要仪器  42-43
    2. 实验方法  43-46
      2.1 主要试剂配制  43
      2.2 细胞复苏  43-44
      2.3 细胞培养及传代  44
      2.4 养心汤含药血清制备  44-45
      2.5 模型制备及分组  45
      2.6 观测指标及方法  45-46
    3. 统计方法  46-47
  结果  47-49
    1.各组HUVEC 细胞形态学观察  47
    2.M TT 法检测HUVEC 增殖活性  47-49
实验二. 养心汤含药血清对H_20_2诱导HUVEC 氧化损伤模型差异基因表达的影响  49-80
  材料与方法  49-61
    1. 实验材料  49-50
      1.1 实验细胞  49
      1.2 实验药物  49
      1.3 主要试剂  49-50
      1.4 主要仪器  50
    2. 实验方法  50-61
      2.1 细胞培养及传代  50
      2.2 养心汤含药血清制备  50
      2.3 模型制备及分组  50
      2.4 观察指标及方法  50-61
  结果  61-67
    1. 各组RNA 电泳结果  61
    2. 养心汤含药血清对H_20_2诱导HUVEC 氧化损伤模型的差异基因表达的影响  61-65
    3. ST3GAL2mRNA 的实时定量PCR 结果  65-67
  讨论  67-80
    1. 关于养心汤含药血清的制备  67-69
      1.1 确定血清供体动物  67
      1.2 确定给药剂量  67-68
      1.3 确定给药次数和采血时间  68
      1.4 关于血清灭活  68-69
    2. 关于低浓度H_20_2建立HUVEC 氧化损伤模型  69-70
      2.1 实验细胞的选择  69
      2.2 HUVEC 氧化损伤模型的建立  69-70
    3. 关于养心汤组方的理论依据  70-72
      3.1 病因病机  70-71
      3.2 治疗原则  71-72
    4. 关于养心汤的组方原则及配伍意义  72-74
    5. 关于养心汤含药血清对H_20_2诱导HUVEC 氧化损伤模型细胞增殖的影响  74-75
    6. 关于养心汤含药血清对H_20_2诱导HUVEC 氧化损伤模型差异基因表达的影响  75-77
    7. 关于养心汤含药血清对H_20_2诱导HUVEC 氧化损伤模型ST3GAL2m RNA.表达的影响  77-78
    8. 展望  78-80
结论  80-81
致谢  81-82
参考文献  82-97
附图  97-99
攻读博士期间发表的论文  99-100
个人简历  100

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学
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