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鹿瓜多肽关节腔注射干预兔膝关节软骨退变的实验研究

作　者: 戴政文
导　师: 邹季
学　校: 湖北中医药大学
专　业: 中医骨伤科学
关键词: 骨关节炎鹿瓜多肽注射液组织学 NO 细胞因子 Ⅱ型胶原
分类号: R274
类　型: 博士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的：探讨鹿瓜多肽关节腔注射对兔膝关节骨关节炎模型软骨退变的保护机制,为临床应用鹿瓜多肽防治骨关节炎提供实验依据。方法：将50只新西兰大白兔随机取40只采用单侧后肢管型石膏伸直位制动法造模,其余的10只不造模,作为正常组。造模成功后将OA模型兔等分为4组,分别为模型组、HA组、鹿瓜多肽Ⅰ组、鹿瓜多肽Ⅱ组。各组分别给予对应的药物关节腔内注射治疗。药物治疗5周后,用空气栓塞法处死动物。再分别用组织学、RT-PCR和生物化学等技术对兔KOA模型关节软骨、关节液和关节滑膜等部位进行检测和评估。本课题分四个实验进行：(1)切开实验侧兔膝关节,用肉眼观察兔股骨关节面大体结构的病理变化；切取适量关节软骨制作成普通光学显微镜切片和透射电子显微镜切片,观察关节软骨超微病理变化。并按照Mankin关节软骨组织学评分系统对光镜下软骨组织的病理变化进行半定量评分,并比较各组间的差异；(2)在切开膝关节之前抽取关节液,检测关节液中NO、IL-1β的含量；观察比较各组关节滑膜的炎症表现及程度；(3)取兔关节软骨,用RT-PCR技术检测药物干预治疗对兔KOA动物模型中关节软骨MMP-3,MMP-13,TIMP-1mRNA表达的影响；(4)切取适量的兔股骨髁负重关节面软骨组织,用免疫组化法分别测量GAG含量和Ⅱ型胶原阳性染色面积,并比较各组间的差异；结果：(1)肉眼观,HA组、鹿瓜多肽Ⅰ组,这二组关节软骨的病理变化肉眼观基本相同,表面大多呈黄色,斑片状或广泛性略显粗糙,未见明显裂纹或缺损,鹿瓜多肽Ⅱ组关节软骨呈浅黄色,表面较光滑；光镜、电镜观察发现,药物治疗后鹿瓜多肽Ⅱ组动物关节软骨细胞的形态、结构、排列等均优于HA组、鹿瓜多肽Ⅰ组。(2)治疗前各组NO、IL-1β含量无明显差异,治疗后鹿瓜多肽Ⅰ组关节液中NO、IL-1β含量与HA组比较无显著性差异(P>0.05)。鹿瓜多肽Ⅱ组关节液中NO、IL-1β含量与其他组相比明显降低,有显著性差异(P<0.05)。关节滑膜及滑液病理对比观察结果表明,HA组、鹿瓜多肽Ⅰ组、鹿瓜多肽Ⅱ组这三组关节腔中滑液无明显增多,滑膜无或有轻度充血、肿胀、增生,滑膜炎症较模型组明显减轻。(3)各组比较,正常组关节软骨中,MMP-3,MMP-13的mRNA表达较低、而TIMP-1的表达较高；模型组关节软骨中MMP-3,MMP-13的mRNA表达明显增高,而TIMP-1表达明显降低。正常组与模型组比较,差异有显著性意义。各治疗组表达值比模型组显著降低(P<0.05)。各治疗组间比较,鹿瓜多肽Ⅰ组与HA组无显著性差异(P>0.05),但鹿瓜多肽Ⅱ组与HA组、鹿瓜多肽Ⅰ组有显著性差异(P<0.05)。(4)各组GAG含量统计结果：①模型组与HA组比较,软骨基质中GAG含量无显著性差异,P>0.05；②鹿瓜多肽Ⅰ组、Ⅱ组与HA组、模型组分别比较,鹿瓜多肽组软骨基质中GAG含量有显著性差异,P<0.01；③鹿瓜多肽Ⅰ组、Ⅱ组间比较,软骨基质中GAG含量有显著性差异,P<0.01；Ⅱ型胶原阳性染色面积统计结果：①模型组与HA组比较,阳性染色面积比无显著性差异,P>0.05；②鹿瓜多肽Ⅰ组、Ⅱ组与HA组、模型组分布比较,鹿瓜多肽组阳性染色面积有显著性差异,P<0.01；③鹿瓜多肽Ⅰ组、Ⅱ组间比较,阳性染色面积有显著性差异,P<0.01。结论：(1)鹿瓜多肽注射液可以明显减少KOA动物模型关节液中NO、IL-1p含量,并能够抑制滑膜炎症；(2)鹿瓜多肽关节腔注射治疗KOA动物模型,能抑制MMPs表达,增加TIMP-1表达,抑制关节软骨胶原的降解,从而延缓关节软骨退变；(3)鹿瓜多肽关节腔注射治疗KOA动物模型,不仅能提高ECM中GAG含量,促进Ⅱ型胶原的合成,且效果与剂量有一定关系。(4)鹿瓜多肽可促进KOA动物模型关节软骨细胞外基质合成,并对新合成的基质降解有显著抑制作用通过对关节软骨肉眼大体观察、光镜下的组织病理学观察,以及电镜的超微结构变化的研究,结果表明：在上述各种因素的共同作用下,鹿瓜多肽能够促进Ⅱ型胶原合成、提高GAG含量,抑制ECM降解,减轻或控制KOA炎症反应,从而维护和保持关节软骨正常的结构和功能,延缓兔KOA模型关节软骨退行性病变的进程。

全文目录

中文摘要  4-7
ABSTRACT  7-11
英文缩略对照表  11-12
前言  12-14
实验一鹿瓜多肽对OA动物模型软骨组织形态学影响  14-24
  1.材料与方法  17-19
  2.结果  19-21
  3.讨论  21-24
实验二鹿瓜多肽对OA动物模型关节滑液中NO、IL-1β等 #13含量的影响  24-30
  1.材料与方法  26-27
  2.结果  27-28
  3.讨论  28-30
实验三鹿瓜多肽对OA动物模型软骨细胞中MMP-3、MMP-13、TIMP-1mRNA表达的影响  30-36
  1.材料与方法  32-33
  2.结果  33-34
  3.讨论  34-36
实验四鹿瓜多肽对OA动物模型软骨组织中蛋白多糖 #25Ⅱ型胶原的影响  36-46
  1.材料与方法  39-42
  2.结果  42-44
  3.讨论  44-46
结论  46-48
参考文献  48-52
文献综述  52-62
  参考文献  57-62
附图  62-71
致谢  71

鹿瓜多肽关节腔注射干预兔膝关节软骨退变的实验研究

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