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辣椒疫病生物防治研究

作　者: 刘乐涛
导　师: 曹远银
学　校: 沈阳农业大学
专　业: 植物病理学
关键词: 辣椒疫病细菌放线菌鉴定发酵条件定殖防病促生
分类号: S436.418
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

本文针对辣椒疫霉菌(PhytqpAthora capsici)分离筛选出两株根际生防细菌B4和放线菌A10。从菌种的分离筛选、鉴定、摇瓶发酵条件、定殖规律、防病促生及对辣椒体内防御酶系活性影响等方面进行了系统研究,结果如下:1.生防菌的分离筛选采用稀释分离法,从辽宁不同地区辣椒根际土壤中分离获得细菌298株,放线菌265株。采用平板对峙和无菌滤液生长速率法得到两株对辣椒疫霉菌(P.capsici)菌丝生长和孢子囊萌发均有较强抑制作用的根际生防细菌B4和放线菌A10。试验表明,菌株B4和A10的活性产物能引起辣椒疫霉菌(P.capsici)的菌丝扭曲、断裂或膨大、明显畸形、分枝增多、分枝顶端细胞壁破裂、原生质外溢,产生溶菌现象,孢子囊萌发率降低。同时B4和A10的稀释无菌滤液均能促进辣椒种子的萌发。2.生防细菌B4和放线菌A10的分类鉴定通过对B4和A10的形态特征、培养特征及生理生化特性等方面的试验,初步鉴定B4为短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus),A10为链孢囊菌属(Streptosporangium)的白色亚群,其特征与达勒木链霉菌(S.durhamensis)相似,菌株的详细分类地位有待于做进一步的分子鉴定。3.生防细菌B4和放线菌A10发酵条件研究通过单因子试验和正交试验设计,优化了生防细菌B4和放线菌A10发酵培养基的组成,同时测定了温度、pH值、接种量、通气量等对两株菌抑菌活性的影响。B4优化发酵培养基的最佳配方为:大豆粉1%,葡萄糖0.5%,NaCl 0.3%,KNO30.5%。B4的最适生长温度为30℃,最适pH值为7.0～7.5,最适接种量为4%,最适装液量为50 ml/250 ml。A10优化发酵培养基的最佳配方为:大豆粉1%,可溶性淀粉1.5%,胰蛋白胨0.5%,NaCl 0.3%,CaCO3 0.25%。A10的最适生长温度为26℃,最适pH值为5.5,最佳发酵时间约为96 h,最适接种量为6%,最适装液量为80 ml/250 ml,。4.生防细菌B4和A10对辣椒体内防御酶系活性影响接种B4+A10的混合处理对辣椒体内相关防御酶系PAL、POD、PPO、SOD和CAT的活性具有诱导作用,且酶活出现高峰的时间及变化幅度都早于或高于单独接种辣椒疫霉菌(P.capsici)的处理。接种B4+A10的混合处理的PAL、POD、SOD活性变化幅度大于接种B4+A10+辣椒疫霉菌(P.capsici)的混合处理。5.生防细菌B4和放线菌A10在辣椒根部及根际土壤中的定殖动态研究生防细菌B4和A10可以在辣椒的根部成功的定殖,且二者在辣椒根际土壤中有较强的定殖能力。研究发现接种辣椒疫霉菌(P.capsici)时,能促进A10在辣椒根部的定殖,两株生防菌在辣椒根际土壤中的定殖能力与其在平板上的抑菌带大小无相关性。6.生防细菌B4和放线菌A10的防病促生作用研究生防菌B4和A10可以使辣椒疫病的发病时间延迟,发病率降低,并且能促进辣椒的生长,表现出较强的防病促生能力。在温室试验中,防效作用最佳的是B4与A10的混合使用防效达到72.5%。促生作用最佳的是B4,辣椒鲜重增加44.1%,干重增加36.2%。在田间试验中,防效作用最佳的是B4与A10混合使用,混合使用能起到预防作用,在接种11 d后,防效达到76.2%。促生作用最佳的是B4,接种20 d辣椒鲜重增加81.5%,干重增加69.6%,果重增加74.1%,其中B4与A10的混合使用能使辣椒根重增加47.9%。

全文目录

摘要  10-12
Abstract  12-14
前言  14-15
第一章文献综述  15-27
  1 辣椒疫病的发生与防治  15-17
  2 土传病害生防微生物研究进展  17-27
第二章辣椒疫病根际生防菌的分离与筛选  27-35
  1 材料与方法  27-29
  2 结果与分析  29-33
    2.1 辣椒根际土壤生防菌的分离  30
    2.2 辣椒根际生防菌的筛选  30-31
    2.3 生防菌无菌滤液对辣椒疫霉菌抑菌活性的测定  31-32
    2.4 生防菌无菌滤液对辣椒疫霉菌孢子囊萌发的影响  32-33
    2.5 生防菌无菌滤液对辣椒种子出芽率的影响  33
  3 小结  33-35
第三章辣椒疫病根际生防菌的分类鉴定  35-48
  第一节生防细菌B4的形态学及生理生化性状鉴定  35-41
    1 材料与方法  35-38
    2 结果与分析  38-40
      2.1 形态学特征  38
      2.2 生理生化反应  38-40
    3 小结  40-41
  第二节生防放线菌A10的分类鉴定  41-48
    1 材料与方法  41-44
    2 结果与分析  44-47
      2.1 形态学特征  44-45
      2.2 培养特征  45-46
      2.3 生理生化反应  46-47
    3 小结  47-48
第四章生防菌摇瓶发酵条件的研究  48-73
  第一节生防细菌B4摇瓶发酵条件的研究  48-61
    1 材料与方法  48-52
    2 结果与分析  52-61
      2.1 B4菌量与吸光度相关性的测定  52
      2.2 单因子试验  52-57
      2.3 正交试验优化培养基  57-58
      2.4 发酵条件对B4的生长及产生抗菌物质的影响  58-61
    3 小结  61
  第二节生防放线菌A10摇瓶发酵条件的研究  61-73
    1 材料与方法  61-65
    2 结果与分析  65-72
      2.1 A10菌丝生长与抗生素产生量相关性的测定  65-67
      2.2 营养条件对A10产生抗生素的影响  67-70
      2.3 培养条件对A10产生抗生素的影响  70-72
    3 小结  72-73
第五章生防菌对辣椒体内防御酶系的动态影响  73-81
  1 材料与方法  73-76
  2 结果与分析  76-80
    2.1 蛋白质含量的测定  76
    2.2 多酚氧化酶(PPO)的活性变化  76-77
    2.3 过氧化物酶(POD)的活性变化  77-78
    2.4 苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性变化  78
    2.5 超氧化物歧化酶(SOD)的活性变化  78-79
    2.6 过氧化氢酶(CAT)的活性变化  79-80
  3 小结  80-81
第六章生防菌在辣椒根部及根际土壤中的定殖研究  81-85
  1 材料与方法  81-82
  2 结果与分析  82-84
    2.1 标记菌株的回收检测  83
    2.2 标记菌株抗辣椒疫霉菌活性测定  83
    2.3 标记菌株在辣椒根部及根际土壤中的定殖动态  83-84
  3 小结  84-85
第七章生防菌对辣椒抗病促生作用的研究  85-92
  1 材料与方法  85-87
  2 结果与分析  87-90
    2.1 生防菌B4和10对辣椒疫病的防治结果  87-89
    2.2 生防菌B4和A10对辣椒促生作用研究  89-90
  3 小结  90-92
第八章结论与讨论  92-97
参考文献  97-105
致谢  105-106
攻读硕士学位期间发表文章  106

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