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海洋真菌产生物碱代谢调节的研究

作　者: 边猛
导　师: 田黎
学　校: 青岛科技大学
专　业: 生物化工
关键词: 海洋真菌生物碱代谢调节诱导子共培养
分类号: Q93
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

海洋微生物产生的次级代谢产物正在受到越来越多的关注，生物碱由于结构特别、种类繁多和良好的应用前景而受到重视。对海洋真菌产生物碱进行代谢调节的研究在海洋微生物次级代谢产物研究领域尚未见文献报道。本论文使用生物诱导子和非生物诱导子对3株具有较强抑菌活性的海洋真菌出发菌株进行了诱导，考察了各种诱导子对海洋真菌产生物碱的影响；并进一步以共培养作为一种诱导手段，研究了共培养对海洋真菌产生物碱及菌体生长的影响。本论文使用的诱导子包括细菌诱导子、真菌诱导子、氨基酸前体物和生长抑制剂四类，其中细菌诱导子为本论文首次使用，在国内外同类研究中尚未见报道。结果表明，除生长抑制剂对3种海洋真菌产生物碱均起到了明显的抑制作用外，前3类诱导子以适宜的种类和浓度对海洋真菌进行诱导时均能够显著提高其生物碱的产量。首次使用的细菌诱导子所表现出的诱导效果整体上要强于其它3类诱导子，当以海洋细菌V89诱导子以10μg／mL的浓度诱导海洋真菌Z15时，生物碱产量提高达44.1％。在共培养条件下，海洋真菌和海洋放线菌的生长和代谢情况都会出现较大变化，表现为生长高峰期和生物活性物质出现时间大幅度提前，同时发酵液抑菌活性明显提高。与海洋细菌共培养能显著提高海洋真菌生物碱产量，当海洋细菌BBy9-4以10％的接种量与海洋真菌YUP08共培养时，生物碱产量提高达119.7％。

全文目录

摘要  3-4
ABSTRACT  4-11
前言  11-25
  1 海洋微生物及其活性物质  11-18
    1.1 海洋细菌活性物质  13-15
    1.2 海洋放线菌活性物质  15-17
    1.3 海洋真菌活性物质  17-18
  2 海洋微生物所产的生物碱  18-21
    2.1 生物碱  18-19
    2.2 海洋微生物生物碱研究进展  19-21
  3 微生物代谢调控研究  21-25
    3.1 微生物代谢调控常用方法  21-22
      3.1.1 培养基优化  21
      3.1.2 诱变  21-22
      3.1.3 诱导子  22
    3.2 诱导子研究进展  22-25
      3.2.1 诱导子的种类  22-23
      3.2.2 诱导子的作用效果与成分  23
      3.2.3 诱导子的作用机理  23-25
第一章诱导子对海洋真菌生物碱代谢的调节作用  25-51
  1 材料和方法  25-30
    1.1 材料  25-26
      1.1.1 实验菌株  25
      1.1.2 培养基  25-26
      1.1.3 实验仪器  26
    1.2 诱导子的制备  26-27
      1.2.1 所用的诱导子  26-27
      1.2.2 生物诱导子的制备  27
      1.2.3 非生物诱导子的制备  27
    1.3 生物诱导子含糖量的测定  27-28
      1.3.1 3,5-二硝基水杨酸试剂的制备  27
      1.3.2 1mg/mL葡萄糖标准溶液的制备及葡萄糖标准曲线的测定  27-28
      1.3.3 诱导子中糖含量的测定  28
    1.4 生物碱总含量的测定  28-29
      1.4.1 柠檬酸-盐酸缓冲液的配制  28
      1.4.2 0.04%(m/v)溴甲酚绿溶液的配制  28
      1.4.3 测定步骤  28-29
    1.5 Z15、QJ-9、YUP08菌株生长曲线的测定  29
    1.6 最佳诱导条件的确定  29
    1.7 各种诱导子对Z15、QJ-9、YUP08菌株生长和产生物碱的影响  29
      1.7.1 诱导子对Z15、QJ-9、YUP08菌株产生物碱的影响  29
      1.7.2 各处理发酵液pH值与生物碱产量之间的关系测试  29
      1.7.3 各处理发酵液生物量与生物碱产量之间的关系测试  29
    1.8 Z15菌株经诱导后产生物碱情况的HPLC检测  29-30
  2 结果  30-49
    2.1 实验菌株鉴定结果  30-31
    2.2 Z15、QJ-9、YUP08菌株生长曲线的测定  31-32
    2.3 最佳诱导条件的确定  32-34
    2.4 各种诱导子对Z15、QJ-9、YUP08菌株生长和产生物碱的影响  34-47
      2.4.1 生物诱导子对Z15、QJ-9、YUP08菌株产生物碱的影响  34-36
      2.4.2 生物碱前体物对Z15、QJ-9、YUP08菌株产生物碱的影响  36-39
      2.4.3 微生物生长抑制剂对Z15、QJ-9、YUP08菌株产生物碱的影响  39-41
      2.4.4 各处理发酵液pH值与生物碱产量之间的关系  41-43
      2.4.5 各诱导子处理发酵液后生物量与生物碱产量之间的关系  43-46
      2.4.6 小结  46-47
    2.5 Z15菌株经诱导后产生物碱情况的 HPLC检测  47-49
  3 讨论  49-51
第二章共培养对海洋真菌生物碱代谢的调节作用及对菌体生长和发酵液抑菌活性的影响  51-76
  1 材料和方法  51-55
    1.1 材料  51-52
      1.1.1 实验菌株  51
      1.1.2 培养基  51-52
      1.1.3 实验仪器  52
    1.2 菌株发酵液抑菌活性的测定  52-53
      1.2.1 孢子悬浮液的制备  52
      1.2.2 实验方法  52-53
      1.2.3 活性指标的确定  53
      1.2.4 抑菌效力值(e)的确定  53
    1.3 各菌株生长曲线的测定  53-54
    1.4 共培养对各菌株生长的影响  54
    1.5 共培养对各菌株发酵液抑菌活性的影响  54
    1.6 以共培养诱导Z15、QJ-9、YUP08菌株对其生长和产生物碱的影响  54
    1.7 共培养对 YUP08菌株产生物碱影响的 HPLC检测  54-55
  2 结果  55-74
    2.1 实验菌株鉴定结果  55
    2.2 各菌株生长曲线的测定  55-57
    2.3 共培养对菌株生长的影响  57-59
    2.4 共培养对菌株发酵液抑菌活性的影响  59-64
      2.4.1 各菌株单独培养时发酵液的抑菌活性  59-61
      2.4.2 共培养时菌株发酵液的抑菌活性  61-64
    2.5 以共培养诱导Z15、QJ-9、YUP08菌株对其生长和产生物碱的影响  64-70
      2.5.1 共培养对Z15、QJ-9、YUP08菌株产生物碱的影响  64-66
      2.5.2 以共培养诱导时发酵液 pH值与生物碱产量之间的关系  66-68
      2.5.3 以共培养诱导时发酵液生物量与生物碱产量之间的关系  68-70
      2.5.4 小结  70
    2.6 以共培养诱导 YUP08菌株产生物碱情况的 HPLC检测  70-74
      2.6.1 YUP08菌株的发酵产物  70-72
      2.6.2 YUP08菌株所产生物碱的 HPLC检测  72-73
      2.6.3 共培养对 YUP08菌株产生物碱的影响  73-74
  3 讨论  74-76
结论  76-77
参考文献  77-82
附录  82-84
致谢  84-85
攻读学位期间发表的学术论文  85-86

海洋真菌产生物碱代谢调节的研究

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