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抗植物病原菌的海洋真菌筛选及鉴定

作　者: 许兰兰
导　师: 李昆志；黄庶识
学　校: 昆明理工大学
专　业: 植物学
关键词: 海洋真菌抗菌活性植物病原真菌筛选鉴定
分类号: S476.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

十分独特的海洋生态环境使海洋微生物产生了与陆地微生物不同的代谢系统和防御体系,从海洋微生物中提取的生物活性物质常常具有新颖的化学结构和特异的生理功能,近年来广泛应用于生物防治方面,已成为开发农用抗生素的新的途径。目前国际上海洋微生物资源的开发研究都主要集中在近海。本文从北部湾红树林生态区的近海区域采集了海底底质样和水样,分离浅海微生物,筛选具有抗植物病原菌活性的菌株,并对活性微生物菌株的生理生化特性和ITS序列等进行了初步研究,为进一步研制抗植物病害的生物防治剂提供活性菌株和基本参数。从北部湾的钦州沙井港和大灶江近海海域采集多个海泥和海水样品三次,并从中分离海洋真菌。以荔枝霜疫霉病菌、荔枝炭疽病菌、水稻稻瘟病菌和水稻纹枯病菌作为指示菌,先采用平板对峙法筛选具有抗菌活性的菌株,然后制备其发酵液,通过菌丝生长抑制法进行复筛,测定其抗菌活性。然后选择抗菌活性强的几株菌进行发酵液对荔枝采后的抗菌实验,验证其实际应用效果。再通过耐盐度试验检验它们是否为严格的海洋微生物,进一步通过形态学观察和ITS基因序列的测定,对其中有代表性的菌株进行分子鉴定和系统发育分析,最后确定其种属。研究结果表明本试验共分离到64株海洋霉菌。通过对其中的14株海洋霉菌进行初筛,获得13株具有抗植物病原菌的活性霉菌株,其中020103、020204、020102抗菌作用最明显。在其中选取抗菌活性较强的10株进行复筛,所有菌株对水稻纹枯病菌的菌丝的生长均有抑制作用。其中010104对水稻纹枯病菌的抑制效果最好,达到71%。以水稻稻瘟病菌作指示菌时,出现二种情况：一是发酵液抑制指示菌的生长,共4株,所占比例为40%；二是发酵液对指示菌的生长起促进作用,所占比例为60%。其中010104对水稻稻瘟霉病菌的抑制效果最好,达到61%。大多数菌株的发酵液对荔枝霜疫霉病菌菌丝的生长有抑制作用,其中020202对荔枝霜疫霉病菌的抑制效果最好,菌丝生长抑制率达到93%,其次是020103和010104,菌丝生长抑制率达到86%和71%。对荔枝炭疽病菌抑制效果最好的是020103,菌丝相对生长抑制率为55%。选取抗菌活性强且菌落特征有代表性的菌株5株,编号分别为010104、020205、020202、020102、020103,对其进行了荔枝采后抗菌试验,结果表明,常温下几种海洋真菌的发酵液处理鲜果的褐变指数小于杀菌剂处理组,其中020102菌株效果最好。010104的发酵液对荔枝炭疽有一定的抑制作用。通过对株菌形态学观察、分子鉴定以及系统发育分析,五株海洋真菌的鉴定结果如下：020103是布雷正青霉(Eupenicillium brefeldianum),010104是微紫青霉(Penicillium janthinellum),020205是阿达青霉(Penicillium adametzii),020102是草酸青霉(Penicillium oxalicum),020202是短棒曲霉(Aspergillus clavatonanicus)。

全文目录

摘要  4-6
ABSTRACT  6-8
第一章前言  8-24
  1.1 海洋微生物是农用抗生素的重要来源  8-10
  1.2 海洋真菌及其分离、培养  10-12
  1.3 源于海洋真菌的农用抗生素的研究进展  12-19
  1.4 海洋真菌的鉴定  19-22
  1.5 本研究的主要目的及其意义  22-24
第二章材料与方法  24-32
  2.1 样品的采集  24
  2.2 培养基和试剂  24-25
  2.3 主要仪器设备  25
  2.4 活性菌株的分离及纯化  25-26
  2.5 抗菌活性物质产生菌株的初筛  26
  2.6 抗菌活性物质产生菌株的复筛  26-27
  2.7 荔枝鲜果抗菌实验  27-29
  2.8 筛选菌株的鉴定  29-32
第三章实验结果  32-48
  3.1 样品采集  32
  3.2 海洋真菌的分离  32-33
  3.3 抗菌活性物质产生菌株的初筛  33
  3.4 抗菌活性物质产生菌的复筛  33-37
  3.5 海洋真菌发酵液对荔枝鲜果的防病保鲜效果  37-39
  3.6 抗菌活性物质产生菌株的鉴定  39-48
第四章讨论  48-52
  4.1 海洋真菌的分离与培养  48
  4.2 抗菌活性物质产生菌株的初筛  48-49
  4.3 杭菌活性物质产生菌株的复筛  49
  4.4 海洋真菌发酵液对荔枝鲜果的抑菌活性  49-50
  4.5 海洋真菌的鉴定  50-52
致谢  52-53
参考文献  53-59
附录A攻读硕士期间发表论文目录  59

抗植物病原菌的海洋真菌筛选及鉴定

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